小鼠子宫内膜间质细胞分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官，位于盆腔中部，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。体外培养的子宫内膜间质细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。小鼠子宫内膜间质细胞（MESCs）的基础特性、分离培养、鉴定方法、功能调控及应用，同时附上实验关键注意事项，方便直接用于实验设计与操作。
一、基础生物学特征
组织定位与形态：子宫内膜固有层的主要细胞，呈星形/梭形，可分泌细胞外基质；与单层柱状上皮细胞（cytokeratin+）紧密相邻，在雌/孕激素调控下周期性增殖、分化、凋亡；妊娠时发生蜕膜化（体积增大、多核化、分泌 dPRP/PRL 等）。
标志物：间充质标志Vimentin 阳性、上皮标志Cytokeratin（CK18/19）阴性；可表达 ER、PR；蜕膜化后 dPRP、PRL、Cyclin D3 上调。
功能：调控胚胎着床、蜕膜形成、血管新生；参与子宫内膜周期性修复；与子宫内膜异位症、不孕、流产等疾病密切相关。
二、分离与培养（标准流程）
取材：8–12 周龄雌性 C57BL/6 小鼠，可提前 3 天皮下注射 17β- 雌二醇（100 ng/100 μL）同步动情周期；无菌取子宫，剥离脂肪/系膜，纵向剪开，洗去血迹。
两步酶消化：0.25% 胰酶 37℃消化 30 min；再加 1 mg/mL 胶原酶 Ⅱ，37℃振荡消化 60 min；用含 10% FBS 的 DMEM/F12 终止酶解；依次过 100 μm、40 μm 滤网，去除上皮团块。
差时贴壁纯化：细胞悬液接种于培养瓶，37℃、5% CO₂培养；1–2 h 后转移上清至新瓶（间质细胞贴壁快，上皮细胞贴壁慢）；培养基为 DMEM/F12+10% FBS+1% 双抗。
换液与传代：24 h 首次换液，去除未贴壁细胞；细胞融合至 80% 时，0.25% 胰酶消化传代；建议 P3–P5 用于实验，避免过度传代导致表型漂移。
体外蜕膜化诱导：雌二醇（10⁻⁸ M）+ 孕酮（10⁻⁶ M）联合处理 48–72 h；检测多核化及 dPRP、PRL mRNA/蛋白表达。
三、鉴定方法
形态学：倒置显微镜下呈梭形、星形，排列成漩涡状；蜕膜化后体积显著增大、呈多边形，出现多核巨细胞。
免疫细胞化学/IF：Vimentin（+）、Cytokeratin（−），纯度 > 90%；ER、PR 表达阳性；蜕膜化后 dPRP、PRL 阳性。
qRT-PCR/WB：检测 Vimentin、CK18、dPRP、PRL、ERα、PR 等基因/蛋白表达。
流式细胞术：Vimentin⁺/CK⁻双标检测纯度。
四、关键注意事项与污染控制
无菌操作：全程在超净台内进行，器械需高压灭菌；培养基过滤灭菌，避免真菌/细菌污染。
酶消化时间：胰酶/胶原酶消化过短则细胞产量低，过长会损伤细胞膜，降低存活率。
差时贴壁时长：严格控制 1–2 h，防止上皮细胞污染；必要时可重复 1 次差时贴壁。
血清质量：建议用胎牛血清（FBS），避免批次差异影响细胞增殖与蜕膜化。
避免支原体污染：定期用支原体检测试剂盒筛查，污染后可用支原体清除试剂处理或丢弃。
五、应用领域
生殖生物学：胚胎着床机制、蜕膜化调控、激素信号通路研究。
疾病模型：子宫内膜异位症、流产、多囊卵巢综合征（PCOS）、子宫纤维化。
药物筛选：抗子宫内膜异位症、促着床、保胎药物的体外活性评估。
类器官构建：与子宫内膜上皮细胞共培养，构建功能性子宫内膜类器官模型。
六、常见问题与解决
上皮细胞污染：增加差时贴壁次数；延长胶原酶消化时间；提高滤网过滤精度（40 μm）。
细胞增殖缓慢：更换高质量 FBS；调整培养基 pH（7.2–7.4）；优化培养温度与 CO₂浓度。
蜕膜化效率低：检查激素浓度与处理时间；确保细胞代数（P3–P5）；避免血清中激素干扰。
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