胰酪大豆胨琼脂对照培养基(TSARM,Tryptic Soy Agar Reference Medium)是按《中国药典》标准生产、经出厂适用性检测的标准对照培养基,用于微生物检验中培养基性能的验证与质控,同时也是通用需氧菌培养的基础琼脂。
一、核心配方与原理
配方(每升):胰酪胨 15.0g、大豆木瓜蛋白酶消化物 5.0g、氯化钠 5.0g、琼脂 15.0g;纯化水定容至 1L,灭菌后 pH 7.3±0.2(25℃);常见包装有 12.0g/300mL(对应 40g/L 标准浓度);
胰酪胨 + 大豆蛋白水解物:提供氮源、维生素、生长因子;
氯化钠:维持生理渗透压;
琼脂:热可逆凝固剂(100℃融化,40–42℃凝固)。
外观:淡黄色均一粉末;灭菌融化后为黄色半透明液体,倾注平板后呈淡黄色、表面光滑的固体培养基。
二、标准制备与灭菌
称量对应粉末,加入纯化水,微温搅拌至完全溶解;
分装后,121℃高压蒸汽灭菌 15 分钟(严禁超温/超时,避免营养成分降解);
冷却至 48–50℃(避免烫伤且不凝固),无菌条件下倾注平皿(通常 90mm 皿约 15–20mL/个);
凝固后,30–35℃培养 24–48h 做无菌检查,确认无杂菌后方可使用;
备用平板密封后,2–8℃避光保存,一般不超过 2 周,避免干裂、冷凝水过多或染菌。
三、适用范围与典型用途
培养基适用性试验(药典核心用途):验证实验室自制/外购 TSA 培养基的促生长能力与抑制干扰能力;接种标准质控菌株(枯草芽孢杆菌 63501、金黄色葡萄球菌 26003、大肠埃希菌 44102、铜绿假单胞菌 10104、白色念珠菌 98001、黑曲霉 98003 等),菌量≤100 CFU/平板;
细菌:30–35℃,24–48h;
霉菌/酵母:23–28℃,3–5d;
要求:菌落清晰、计数结果与对照培养基差异≤0.5 log。
需氧菌总数计数:药品、生物制品、医疗器械、食品、化妆品的微生物限度检查中需氧菌平板计数;
菌株纯化、传代、保藏;环境监测(洁净区沉降菌、接触碟)。
四、储存与稳定性
未开封粉末:2–25℃,干燥、密封、避光保存;包装漏气/吸潮结块后禁止使用;
平板培养基:2–8℃密封保存,避免反复温差导致冷凝水;使用前可倒置在培养箱中 1–2h,去除表面水分。
五、关键注意事项与质控要点
必须使用纯化水/注射用水配制,自来水含氯/杂质会抑制微生物或导致污染;
灭菌后严禁剧烈晃动,防止气泡过多影响平板平整度;
培养基适用性试验必须同时设置阳性对照(接种标准菌)、阴性对照(不接种,空白培养);
对照培养基的批号、证书需与检验记录对应,便于追溯;
废弃培养基需 121℃高压灭菌 30 分钟后,按生物安全规范处理。
六、与普通 TSA 培养基的区别
普通 TSA:用于常规培养,质控要求为“用户自行做适用性”;
TSARM(对照培养基):出厂前已完成标准菌株促生长试验,附合格证书,可直接作为仲裁标准,用于实验室 TSA 培养基的性能比对、方法验证、盲样测试。
七、常见问题处理
平板表面有冷凝水:接种前倒置在 37℃培养箱中 30–60 分钟干燥;
菌落形态异常/计数偏低:检查 pH 值、灭菌条件、培养基批号,重新做适用性试验;
培养基融化后凝固过快:可置于 48–50℃水浴中保温,但时间不超过 4 小时。
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