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人T淋巴细胞系的性质、用途与生产工艺!
小杨 / 2022-09-23


一、背景

人T淋巴细胞系是HUT78(ATCCTIB161)的克隆系(Callo,RC,etal)。细胞表面带有CD3、CD4标记。研究表明,该细胞系对人体免疫缺陷病毒(HIV-1)敏感,可用于检测、分离和增殖HIV-1,也可用于其它人类Tcell病毒的研究。

T淋巴细胞(T lymphocyte)简称T细胞,是由来源于骨髓的淋巴干细胞,在胸腺中分化、发育成熟后,通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能。

T淋巴细胞(人T淋巴细胞系)来源于骨髓的多能干细胞(胚胎期则来源于卵黄囊和肝)。在人体胚胎期和初生期,骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内,在胸腺激素的诱导下分化成熟,成为具有免疫活性的T细胞。

成熟的T细胞(人T淋巴细胞系)经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居,并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环,发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质,加强免疫应答,较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志,主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

二、应用

用于Kv1.3钾通道阻断药物对人T淋巴细胞活化的调节及意义研究:

研究DPO-1对人T淋巴细胞上Kv1.3钾通道及IL-2分泌的阻断作用。方法:分离培养人外周血淋巴细胞及Jurkat细胞,利用全细胞膜片钳技术记录T淋巴细胞上的Kv1.3及钙激活的钾(KCa)通道电流,实时定量PCR以及western blot方法检测Kv1.3通道的表达水平,荧光染料fluo-3检测胞内钙离子浓度,并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Jurkat细胞的IL-2分泌。

结果:DPO-1以电压依赖和浓度依赖的模式阻断Kv1.3通道电流,在+40mV的电压下其阻断的IC50在Jurkat细胞中为2.58μmol/L,在外周血T淋巴细胞中为3.11μmol/L。同时,DPO-1加速了Kvl.3的失活速率,并使稳态失活曲线负向移动。无论在Jurkat细胞中,还是在外周血T淋巴细胞中,3μmol/L DPO-1对钙激活的钾(KCa)通道电流均无明显的抑制作用。

在Jurkat细胞中,3、10μmol/L的DPO-1孵育24小时后,细胞上的Kv1.3钾通道电流密度下调,且蛋白表达水平分别减少48±6%、60±9%。此外,DPO-1孵育可抑制钙耗竭Jurkat细胞的钙离子内流,并减少激活的Jurkat细胞IL-2的分泌。

结论:Kv1.5通道阻断剂DPO-1可阻断Kv1.3钾通道,减少Kvl.3通道的表达,抑制Jurkat细胞的钙离子内流及IL-2分泌。DPO-1具有免疫调节作用,可能有利于它在房颤治疗中的应用。

研究Acacetin对人T淋巴细胞上Kv1.3钾通道的阻断作用,同时观察在T淋巴细胞中Acacetin是否具有免疫调节作用。方法:分离培养外周血淋巴细胞及Jurkat细胞,采用全细胞膜片钳技术记录Kv1.3钾通道及钙激活的钾通道(KCa)电流;利用实时定量PCR及western blot检测Kvl.3钾通道的表达;用fluo-4AM钙荧光染料反映Jurkat细胞钙离子浓度变化,CCK-8试剂盒检测T淋巴细胞的增殖,并用ELISA方法观察IL-2的分泌水平。

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