节菱孢霉属通用PCR试剂盒的知识与特点及应用！
小杨 / 2024-01-13 08:31:45
一、背景
节菱孢霉属通用PCR试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增，采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。
节菱孢霉属通用PCR试剂盒中配制的酶均为进口的酶，RT酶采用进口的M-MLV，因此cDNA更加稳定。同时，该试剂盒具有高灵敏度，可以检测到低拷贝数的目标基因。
灵敏度高：该试剂盒能够检测低拷贝数或多样性模板，这意味着即使目标基因的表达水平很低，也可以通过该试剂盒进行准确的检测。
特异性好：该试剂盒的引物是根据EB病毒专一区设计的，特异性高，可以确保只针对目标基因进行扩增，减少非特异性扩增的干扰。
闭管操作：该试剂盒采用一管式闭管操作，降低了交叉污染的风险，提高了实验的准确性。
重复性好：该试剂盒的扩增曲线重合度高，受干扰影响少，这意味着在不同的实验中，可以得到一致的、可重复的结果。
扩增效率高：该试剂盒的扩增曲线Ct值低，起峰快，效率高，这意味着可以在短时间内得到大量的目标基因扩增产物。
三、应用
节菱孢霉属通用PCR试剂盒可以用于小蓬竹（Drepanostachyum luodianense）内生真菌与根际真菌多样性的研究：
对小蓬竹不同组织中的内生真菌使用节菱孢霉属通用PCR试剂盒分离与鉴定。本实验用组织块分离法共计从180个供试组织块中共分离得到81株内生真菌,用组织液研磨提取法共计从120个培养基平板中分离得到22株内生真菌。统计发现,小蓬竹内生真菌总内生真菌的定殖率为47.2%,根、茎和叶定殖率分别为73.3%、35.0%和33.3%;总的分离率为45%,根、茎和叶分离率分别为91.7%、20.0%和23.3%,均为根最高,茎叶次之,呈现随着植物组织的成熟程度而增加的趋势。对分离到的103株通过经典形态学和分子生物学方法对其进行鉴定,分属于1个亚门、5个纲、10个目、17个科、19个属、31个种(含2个可能的新种),在属的分类水平上,以节菱孢霉属(Arthrinium)、镰刀菌属(Fusarium)、木霉属(Trichoderma)、炭角菌属(Xylaria)为优势菌属,分别占菌株总数的12.62%、9.71%、6.80%。结果表明了小蓬竹内生真菌的丰富多样性。
通过使用节菱孢霉属通用PCR试剂盒将小蓬竹内生真菌多样性及组织分布特性。在小蓬竹内生真菌的数量和种类及分布上,不同组织中存在明显差异并表现出一定的组织特异性:根中内真菌的分离频率最高,达到61.17%,其中镰刀菌属与漆斑菌属的分离频率最高;茎中以拟茎点霉属、弯孢聚壳属等为优势菌属;叶片中节菱孢霉属为优势菌属。在多样性指数方面:小蓬竹内生真菌Shannon-Wiene和Simpson指数依次为2.800、0.932,不同组织在变化趋势上一致,均为根最高,茎其次,叶片最低;小蓬竹内生真菌均匀度指数E为0.604,茎为最高,根其次,叶片最低。此外,不同组织中内生真菌菌群的相似性比较发现根茎的相似性最低,茎叶的相似性最高。
通过使用节菱孢霉属通用PCR试剂盒将小蓬竹根部内生真菌与根际土壤真菌的比较,发现其共同存在的真菌类群为暗双孢属(Cordana)、节菱孢霉属(Arthrinium)、脉孢菌属(Neurospora)、木霉属(Trichoderma)、漆斑菌属(Myrothecium),表明两个类群之间存在密切的联系,可能存在互相交流和传播。另外研究发现,在根组织分离得到内生真菌中优势菌群为镰刀菌属与漆斑菌属,以寄生性较强菌群为主;而根际土壤真菌的优势菌群为青霉菌属、木霉属、曲霉属一类腐生性较强的菌群为主,说明两个类群之间亦存在明显差异,表明内生真菌可能具有其他来源。
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