一、背景
JF305人胰腺癌细胞来源于人胰腺，呈上皮细胞样，贴壁生长。
二、JF305人胰腺癌细胞细胞特性：
1）来源：胰腺
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
3）规格：1×106cells
4）培养条件：1640+10%FBS+1%P/S；空气，95%；二氧化碳，5%，37℃。
三、JF305人胰腺癌细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。
2）细胞处理：
复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。
四、JF305人胰腺癌细胞复苏、传代及冻存流程：
1、细胞复苏
1）配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；
2）细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；
4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。
2、细胞传代
1）待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；
2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；
3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。
3、细胞冻存
1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；
2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。
3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。
五、用途
JF305人胰腺癌细胞可以用于DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305生长和增殖的影响：
通过研究肿瘤抑制基因DPC4对人胰腺癌细胞系JF305生物学行为的影响,探讨DPC4基因抑制胰腺癌生长的机制,为此癌的基因治疗提供理论及实验依据。
方法：选择无DPC4表达的人胰腺癌细胞系JF305为实验细胞,采用脂质体介导法将pBK-CMV-DPC4质粒导入JF305中,以转染空质粒pBK-CMV的JF305细胞为阴性对照,未转染的JF305为空白对照,并以含G418 400μg/ml的DMEM进行筛选培养,收集上述三种细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法检测上述三种细胞中DPC4的表达;通过测定细胞生长曲线、细胞周期、细胞粘附率和细胞集落形成率检测人胰腺癌细胞系中JF305转染DPC4前后生长、增殖等生物学行为的改变。
结果：经G418选择性培养后只有转染质粒pBK-CMV-DPC4和pBK-CMV的JF305细胞仍然存活。转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞有DPC4基因表达,而未转染及转染空质粒的细胞无表达。通过细胞记数和MTT法测定发现转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞增殖能力同转染前及转染空质粒的JF305细胞相比明显受到抑制,细胞倍增时间显著延长,G1期细胞数所占比例明显增加,G2/M期细胞数所占比例明显下降,细胞克隆形成率和贴壁率均明显下降,两者差异显著,P<0.001。
结论：DPC4转染人胰腺癌细胞系JF305后,JF305可稳定表达DPC4。DPC4可使JF305细胞的G1期细胞明显增多,G2/M期细胞明显减少,而且明显抑制其生长和增殖能力,明显降低其增殖潜力和生存能力。表明DPC4的缺失与胰腺癌的发病关系密切,可能是胰腺癌发生、发展过程中的一个重要的分子事件。DPC4可能成为胰腺癌基因治疗的重要靶位基因。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！