艰难梭菌的致病性与耐药性及诊断方法！

一、菌种简介

艰难梭菌为革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，卵圆形芽胞位于次极端。芽胞在外环境可存活数月。分离培养基常用环丝氨酸一甘露醇等特殊培养基。艰难梭菌能形成芽胞，对热力、干燥、消毒剂等理化因素均有强大的耐受性，在干燥、消毒剂环境中可存活数月，在衣服、家具和环境中广泛存在。 

艰难梭菌是人类肠道正常菌群成员，不规范使用抗生素时，可导致肠道菌群失调。耐药的艰难梭菌大量生长繁殖，导致抗生素相关性腹泻和伪膜性肠炎等疾病。 

二、致病性

艰难梭菌是一种厌氧生长的革兰阳性梭状产毒芽孢杆菌，为人类肠道中的正常菌群，抗生素的应用可导致该菌过度生长。自1978年开始，艰难梭菌被认为与抗生素相关性腹泻有关，曰前认为25%的抗生素相关性腹泻由艰难梭菌引发。随着广谱抗菌药物的广泛使用，在全球范围内，艰难梭菌相关性腹泻发生率不断升高，近年来出现暴发流行，其流行菌株发生基因变异，产生毒素的能力增加，患者病死率及病情复发率升高，已引起医学界的重视。

艰难梭菌可产生两种毒素：肠毒素和细胞毒素。肠毒素能趋化中性粒细胞浸润回肠肠壁，释放细胞因子，导致肠道大量失水和出血性坏死。细胞毒素能解聚肌动蛋白，损坏细胞骨架，导致局部肠壁细胞坏死，有直接损伤肠壁作用。

艰难梭菌感染大多数为无症状携带者。长期服用抗生素可引起内源性感染。若易感人群较多，也可引起外源性感染。耐药艰难梭菌能导致抗生素相关性腹泻和假膜性结肠炎等疾病。
 
艰难梭菌感染引起肠炎，主要是结肠段的肠炎。长期大量应用抗生素，尤其是作用于肠道细菌的广谱抗生素，如氨苄西林、阿莫西林、克林霉素和各种头孢菌素等，可杀灭或抑制肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌等正常菌群的细菌，失去或减弱了对艰难梭菌的拮抗作用；而对这些抗生素耐药的艰难梭菌则大量增殖，引起菌群失调。导致抗生素相关性腹泻。 

1、伪膜性肠炎（pseudomenbranous colitis，PMC）：临床表现为腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状，症状突然开始，并伴随血压低，严重时能致死。通常还伴有发烧，白细胞增多，之后可导致死亡，是很严重的一类疾病。 

2、抗生素相关性腹泻（antibiotic-associated diarrhoea）：在体内的潜伏期为5-10天，之后导致大量的棕色或水状腹泻，持续1周左右。 

除上述疾病外，艰难梭菌尚可引起肾盂肾炎、脑膜炎、腹腔及阴道感染、菌血症和气性坏疽等。近年来该菌已成为医院内感染的病原菌之一，日益被人们所重视。 

及时停用长期服用的抗生素，改用敏感药物，治愈后复发率较高（芽胞未被杀死）。 

三、耐药性

本菌对万古霉素或甲硝唑敏感，对氨苄西林、头孢菌素、林可霉素、克林霉素、红霉素等耐药。 

四、诊断方法

1、毒素检测：

组织细胞毒素检测被认为是诊断的金标准，需时48小时，敏感性高，且能检测毒素。 

2、细菌培养：

用环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂培养基进行厌氧培养，需时72小时，灵敏度高且可获得菌株，不能检测毒素。 

3、谷氨酸脱氢酶检测：

谷氨酸脱氢酶是艰难梭菌与梭菌属其他细菌共同的非毒素蛋白质，采用乳胶凝集试验，操作简单快速（15-45分钟），敏感性略低，且与其他厌氧菌存在交叉反应。 

4、基因诊断：

采用聚合酶链技术可检测A毒素、B毒素、二元毒素以及高毒力的菌株，敏感性高。 

5、胶乳（凝集）试验（latex test）：

胶乳绑定抗体后，加入过滤后的粪便滤液，观察起凝集结果。

6、扫描试验（screening test）：

测试普通抗原后，跟随其他特定试验。病人的病史是重要的参考标准。

测试普通抗原可以测定产生毒素的艰难梭菌和不产生毒素的梭菌，也是诊断假膜性肠炎（PMC），抗生素相关腹泻（AAD）的方法。确定仍需其他特定的方法。

7、酶联免疫吸附测定（ELISA）：

是敏感性极高的鉴定方法，由于其设备昂贵则不作为基础检测。优点为敏感和特异性高，得到结果的时间短。

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