大鼠卵巢上皮细胞的背景与应用！
小杨 / 2021-11-25 09:06:25
一、背景
大鼠卵巢上皮细胞分离自卵巢组织是采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。大鼠卵巢上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育(右侧已退化)，呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。
卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢上皮细胞主要功能：①上皮细胞能分泌激素，刺激卵细胞分化成熟；②细胞能分泌炎症介质，参与炎症反应。
二、应用
用于雷洛昔芬对镉染毒去卵巢大鼠肾脏及肾小管上皮细胞的影响研究：
观察雷洛昔芬对镉染毒大鼠肾脏组织及肾小管上皮细胞中ERa、￡1^和MT-la基因表达的影响，探讨该药在镉中毒防治中的保护作用及机制。
方法：①动物部分：选取健康雌性SD大鼠32只，随机分为假手术组，去卵巢组，染镉组与雷洛昔芬组。应用放射免疫法测定四组大鼠血清雌激素；Elisa法测定02-微球蛋白；石墨炉原子吸收法测定血镉、尿镉；PCR及免疫组化检测肾脏组织中ER a、ERP和MT-lamRNA及蛋白水平。
②细胞部分：选取新生SD大鼠的肾脏组织进行细胞培养，采用Percoll法分离纯化肾小管上皮细胞后原代培养。选取第二代细胞进行实验。实验分为空白组,氯化镉组与雷洛昔芬组。4h后采用MTT法检测细胞活力，24h后应用PCR及免疫组化检测ERd、ERP及MT-lamRNA及蛋白水平。
结果：①动物部分：染镉组与假手术组、去卵巢组相比，雌激素水平明显降低（K0.05），肾脏湿重、肾脏系数、尿02-微球蛋白、血镉及尿镉水平均升高（K0.05），肾脏病理检查发现肾小管出现退行性病变，肾间质出现大面积渗血，RT-PCR及免疫组化结果显示ER0及MT-la蛋白表达水平升高（代0.05）。与染镉组相比，雷洛昔芬组雌激素水平明显升高（K0.05）,尿e2-微球蛋白、血镉及尿镉水平均下降（K0.05），肾小管病变减轻，偶见退行性病变，ERP及MT-la蛋白表达水平下降（代0.05），且两者呈正相关（r=0.387，fKO.05）。而ER a mRNA及蛋白表达在染镉组与雷洛昔芬组间变化不显著（乃0.05）。
②细胞部分：与空白组相比，氯化镉组大量细胞的形态发生改变，呈圆型，细胞大量死亡，存活率仅空白组的55.3%,PCR及免疫组化结果显示ERP及MT-la mRNA及蛋白表达水平升高（/<0.05）。氯化镉组相比，雷洛昔芬组仅少量细胞形态发生改变，细胞存活率上升到88.6%，同时ERP,MT-lamRNA及蛋白表达水平下降（K0.05）。而ERa在三组间表达变化不明显，无统计学意义（AO.05）。