停乳链球菌可引起菌血症、心内膜炎、脑膜炎、脓毒性、关节炎、呼吸道和皮肤感染等疾病。
表达停乳链球菌、金黄色葡萄球菌Gap C蛋白重组工程菌的发酵工艺与实验免疫研究
为了确定表达停乳链球菌/Gap C(停乳/Gap C)和金黄色葡萄球菌/Gap C(金葡/Gap C)蛋白工程菌的发酵培养工艺,以及重组蛋白亚单位疫苗的免疫效果。本研究首先对这两株工程菌进行小量培养试验,优化发酵培养工艺,结果通过单因素实验确定停乳/Gap C和金葡/Gap C工程菌的适宜生长条件为：37℃、pH7.0、装液量20%、种龄12h、转数200rpm,而接种量分别为1%、3%。利用优化好的条件,在5L发酵罐上进行放大培养,IPTG诱导工程菌从而表达蛋白,检测蛋白GAPDH活性、抗原性及表达量。结果停乳/Gap C和金葡/Gap C蛋白含量检测结果为2.72mg/ml、2.23mg/ml, GAPDH活性检测及Western Blot检测表明重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原性。 分别用单一和混合重组/Gap C蛋白亚单位油乳剂疫苗免疫小鼠,应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平,应用MTT试验检测细胞免疫效果；用停乳链球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌分离株对二免10d蛋白组和对照组攻毒,结果表明金葡/Gap C和混合/Gap C蛋白免疫组小鼠血清中IgG抗体水平在加强免疫后第14d均达到最高值；MTT试验结果表明免疫组与对照组差异显著；混合/Gap C蛋白免疫组对四种菌株的保护率分别为70%、80%、80%、70%,金葡/Gap C蛋白组对金黄色葡萄球菌的保护率为70%。 选择健康泌乳牛20头,随机分为停乳/Gap C、金葡/Gap C、混合蛋白免疫组和对照组。间隔14d,两次颈部皮下接种蛋白亚单位油乳剂疫苗。结果与免疫前相比较,免后70d时各免疫组感染细菌的乳区数和平均体细胞数均明显下降,而对照组感染细菌的乳区数增加,平均体细胞数逐步上升；ELISA抗体检测结果表明二免后免疫组抗体效价有明显提高,二免后三周达到高峰。 综上所述,研究表明经发酵罐表达的Gap C蛋白的工程菌可用于大量制备亚单位疫苗。Gap C亚单位疫苗能够激发健康泌乳奶牛产生特异性的体液免疫反应；能够降低乳腺中牛乳的细菌数和体细胞数,改善牛奶的品质,为开发新型奶牛乳房炎疫苗奠定了理论基础。
从一起暴发疫情分离的停乳链球菌似马亚种检测分析
查找引起疾病暴发的病原菌 ,了解其生物学特性。对 2 0 0 3年 5月驻石家庄市某高等学校发生的一批不明原因发热病人与周围未发病人群咽拭子进行分离培养与系统鉴定。从 47份样本中分离 19株菌 ,均为乙型溶血性停乳链球菌似马亚种 ,药物敏感性试验对羧苄青霉素、环丙沙星、氨苄青霉素 /舒巴坦、庆大霉素及多数头孢类药物敏感 ,对氨苄青霉素、头孢他啶等药物耐药。引起这次暴发的病原菌为乙型溶血性停乳链球菌似马亚种 ,菌株对羧苄青霉素、环丙沙星、氨苄青霉素 /舒巴坦、庆大霉素及多数头孢类药物敏感。
停乳链球菌内蒙分离株抗原基因MIG的克隆
停乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌,根据GenBank中登陆的停乳链球菌表面蛋白MIG基因序列,设计一对引物,采用PCR的方法从临床分离的停乳链球菌内蒙分离株基因组DNA中扩增出MIG基因,得到一条1900bp的片段。将其连入PMD-19T载体中,经酶切,PCR及序列测定法进行鉴定。经DNA测序分析,证实与GenBank中停乳链球菌MIG基因(AF354651)序列同源性为95%,具有高度保守性。