国家对饮料中大肠杆菌的检测方法-百欧博伟ATCC菌种
中国微生物菌种查询网 / 2018-09-13 09:15:26
国家对饮料中大肠杆菌的检测方法-百欧博伟ATCC菌种
一、设备和材料
1 平皿：直径90mm。
2 天平：感量0.1g。
3 显微镜。
4 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。
5 玻璃珠：直径约5mm。
6 菌落计数器。
7 吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。
8 水浴箱：44.5±0.5℃。
9 培养箱：36±1℃,44.5±0.5℃。
10 冰箱: 0～5℃和-15～-20℃。
11 均质器。
12 乳钵和研棒。
二、样品制备
1、不同食品样品匀液的制备
以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验,应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品,应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2～5℃ 18h内解冻,或在45℃以下15min内解冻。
2、固体和半固体食品
以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。
以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验,应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品,应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2～5℃ 18h内解冻,或在45℃以下15min内解冻。
3、稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验,应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品,应置于4℃冰箱保存。检验前冷冻样品可于2～5℃ 18h内解冻,或在45℃以下15min内解冻。
三、大肠杆菌测定
1 将6.3条中的EC肉汤管继续培养24h,取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。
2 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。
3 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
4 将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。
色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL至13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。
将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。
Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1℃培养96h记录有无生长。
LST肉汤：于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。
革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。
大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下图：
如出现上表以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做重复试验。
5 结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为＋＋－－或－＋－－,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。