沙门氏菌、志贺氏菌增菌液的使用原理与操作方法及注意事项！
小杨 / 2026-01-30 10:19:09
沙门氏菌、
志贺氏菌增菌液是微生物检测中针对这两类致病菌的选择性增菌培养基，核心作用是在样品中目标菌数量少、杂菌干扰大的情况下，抑制杂菌生长，同时为
沙门氏菌、
志贺氏菌提供适宜营养使其快速繁殖，达到后续分离、鉴定的菌液浓度要求；二者因目标菌生理特性差异，增菌液的配方和选择抑制机制略有区别，且检测中常采用分步增菌（预增菌 + 选择性增菌）提升检出率。
一、核心使用原理
1、通用原理
样品（如食品、水样、粪便、环境拭子）中目标菌常为微量存在，且伴随大量
大肠菌群、
葡萄球菌、
芽孢杆菌等杂菌，直接分离易因目标菌数量不足或杂菌覆盖而漏检。增菌液通过营养适配 + 选择性抑制的双重设计，实现目标菌的富集：
营养适配：添加蛋白胨、酵母膏、葡萄糖等基础营养，匹配沙门氏菌、志贺氏菌的异养型代谢需求，满足其生长繁殖的物质和能量供应；
选择性抑制：添加特异性抑菌剂（如胆盐、煌绿、亚硒酸钠、新生霉素等），利用杂菌与目标菌对抑菌剂的耐受度差异，抑制非目标菌生长（
沙门氏菌、
志贺氏菌对这类抑菌剂具有天然耐受性）。
2、沙门氏菌增菌液（常用 SC、TTB 增菌液）
SC 增菌液：含亚硒酸钠（核心抑菌剂）+ 胆盐，亚硒酸钠能强烈抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性杂菌（如
大肠埃希氏菌），对沙门氏菌无抑制；葡萄糖含量低，避免因产酸过多抑制沙门氏菌，适合沙门氏菌的快速富集，是实验室常规使用的增菌液；
TTB 增菌液：含煌绿+ 胆盐，煌绿的抑菌作用更强，适合杂菌含量极高的样品（如肉类、粪便），但煌绿浓度对沙门氏菌有轻微影响，需严格控制培养条件，常与 SC 增菌液搭配使用。
3、志贺氏菌增菌液（常用 GN 增菌液）
志贺氏菌无鞭毛、生长速度慢，且对营养和环境的要求更苛刻，GN 增菌液（革兰氏阴性菌增菌液） 为其专用增菌液，设计上兼顾“弱抑菌 + 慢生长适配”：
抑菌剂为胆盐（低浓度）+ 枸橼酸钠 + 磷酸氢二钾，仅轻度抑制革兰氏阳性菌和部分大肠菌群，避免强抑菌剂抑制志贺氏菌（志贺氏菌对煌绿、亚硒酸钠等强抑菌剂耐受性差）；
缓冲体系（枸橼酸钠 + 磷酸盐）稳定培养基 pH 在 7.0~7.4，防止志贺氏菌生长过程中产酸导致 pH 下降而抑制自身，同时低葡萄糖含量减少代谢产酸，适配其慢生长特性。
二、常用增菌液类型及适用场景
目标菌 增菌液类型 核心抑菌剂 适用场景
沙门氏菌 SC 增菌液 亚硒酸钠 + 胆盐 常规样品（食品、水样），杂菌含量中等
沙门氏菌 TTB 增菌液 煌绿 + 胆盐 杂菌含量极高的样品（粪便、肉类糜）
志贺氏菌 GN 增菌液 低浓度胆盐 + 枸橼酸钠 + 磷酸盐 所有志贺氏菌检测样品，唯一专用选择性增菌液
关键注意：志贺氏菌无专用强选择性增菌液，不可用沙门氏菌的 SC/TTB 增菌液替代（强抑菌剂会直接杀死志贺氏菌）；
沙门氏菌可单独用 SC 或 TTB，也可双增菌液平行使用提升检出率。
三、标准操作方法（实验室微生物检测通用，符合 GB 4789 系列标准）
（一）前置准备
样品前处理：根据样品类型制样，如固体食品（25g 样品 + 225mL 无菌生理盐水/缓冲蛋白胨水）制成 1:10 匀浆，液体样品直接取 25mL+225mL 稀释液，粪便样品取 1g+9mL 无菌生理盐水制成悬液；
预增菌（可选但推荐）：若样品中目标菌可能处于损伤状态（如食品加工中的高温、低温、防腐剂处理），先将上述稀释液接种至缓冲蛋白胨水（BPW），36±1℃培养 8~12h，修复损伤菌的细胞膜，使其恢复生长能力，再转种至选择性增菌液（志贺氏菌检测预增菌可省略，直接接种 GN 增菌液）；
增菌液灭菌：增菌液需 121℃高压蒸汽灭菌 15min，冷却至室温后使用（煌绿、新生霉素等热敏性抑菌剂需灭菌后冷却至 50℃左右无菌添加）；
无菌操作：全程在超净工作台进行，避免杂菌污染。
（二）选择性增菌操作（核心步骤）
取1mL 预增菌液（BPW 培养物） 接种至 10mL SC 增菌液，同时另取 1mL 预增菌液接种至 10mL TTB 增菌液（双增菌平行操作）；
密封试管（松盖，保证通气），36±1℃培养 18~24h；
培养后观察菌液状态：浑浊生长为正常（目标菌富集），无菌生长需重新检测（样品无目标菌或操作污染）。
取1mL 样品稀释液/匀浆 直接接种至 10mL GN 增菌液（无需预增菌，预增菌会导致杂菌过度生长掩盖志贺氏菌）；
36±1℃培养 6~8h（关键：不可培养 24h，志贺氏菌生长慢，培养过久杂菌会大量繁殖抑制其生长）；
培养后取菌液上层（志贺氏菌为兼性厌氧菌，上层氧气充足更易生长）用于后续分离。
（三）后续应用
增菌培养完成后，取 1~2 环增菌液，分别划线接种至对应的选择性分离培养基：
沙门氏菌：SS 琼脂、麦康凯琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD），36±1℃培养 18~24h，挑取可疑菌落鉴定；
志贺氏菌：SS 琼脂、麦康凯琼脂、HE 琼脂，36±1℃培养 18~24h，挑取无色半透明可疑菌落鉴定。
四、关键注意事项（质量控制核心，避免漏检/假阳性）
抑菌剂浓度控制：煌绿、亚硒酸钠浓度过高会抑制沙门氏菌，过低则杂菌泛滥，需严格按配方称量，且热敏性抑菌剂无菌添加；
培养时间严格把控：志贺氏菌 GN 增菌液最多培养 8h，超过则杂菌（如
大肠埃希氏菌）快速生长，与志贺氏菌竞争营养和空间；沙门氏菌培养 18~24h，不足则目标菌富集不够，过长则可能因代谢产物积累抑制自身；
增菌液 pH 校准：灭菌前需将增菌液 pH 调至 7.0~7.4（
沙门氏菌）/7.2~7.4（
志贺氏菌），pH 偏酸会直接抑制目标菌生长，可通过 1mol/L HCl/NaOH 调节；
阴性/阳性对照：每次实验需设置对照，确保增菌液有效性：
阴性对照：无菌生理盐水接种至增菌液，培养后应无菌生长，排除增菌液本身污染；
样品稀释比例：严格按 1:10 接种（1mL 样品/预增菌液 + 10mL 增菌液），样品过多会导致杂菌浓度过高，突破抑菌剂作用，样品过少则目标菌富集不足；
不可交叉使用增菌液：志贺氏菌禁用 SC/TTB 增菌液，沙门氏菌不可用 GN 增菌液（抑菌作用弱，杂菌过多）；
损伤菌修复：食品加工样品、冷藏样品需先做 BPW 预增菌，否则损伤的沙门氏菌无法在选择性增菌液中生长，导致漏检。
五、常见问题及解决办法
增菌液无菌生长：①样品无目标菌；②预增菌时间不足，损伤菌未修复；③抑菌剂浓度过高，杀死目标菌；→ 排查：重做阳性对照，确认增菌液有效性，延长预增菌时间至 12h；
志贺氏菌增菌后分离无可疑菌落：①培养时间超过 8h，杂菌过度生长；②样品稀释比例不当；→ 排查：严格控制 GN 增菌液培养 6~8h，重新按 1:10 接种；
沙门氏菌增菌液杂菌过多：①胆盐/亚硒酸钠/煌绿浓度过低；②样品杂菌含量极高，未用 TTB 强抑菌增菌液；→ 排查：重新配制增菌液，提高抑菌剂浓度，改用 TTB 增菌液；
增菌液浑浊但分离无目标菌：①增菌液被杂菌污染；②目标菌未生长，浑浊为杂菌生长；→ 排查：重做阴性对照，确认增菌液无菌，更换样品前处理方法。
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