耐酸乳杆菌的培养条件与注意事项及保存方法!
小杨 / 2022-12-02 09:40:19


耐酸乳杆菌是Lactobacillus属的微生物,原产地为中国。发酵果糖、半乳糖、葡萄糖和核糖;不发酵棉子糖、松三糖、蜜二糖、山梨醇、阿拉伯糖和木糖。主要用途为研究;生产,具体用途为制作酸性稀奶油。

一、菌种简介
平台编号:Bio-58544
提供形式:冻干物
拉丁属名:Lactobacillus Acetotolerans
中文名称:耐酸乳杆菌
属名:Lactobacillus
种名加词:acetotolerans
来源历史:←东北农业大学(1.0341)←乳品科学教育部重点实验室分离
收藏时间:2006.3.31
原始编号:二月-62
资源归类编码:15131319101
模式菌株:非模式菌株
主要用途:研究;生产
具体用途:生产酸性稀奶油。
特征特性:发酵果糖、半乳糖、葡萄糖和核糖;不发酵棉子糖、松三糖、蜜二糖、山梨醇、阿拉伯糖和木糖。    
生物危害程度:四类
致病对象:无
分离基物:稀奶油
采集地:内蒙古自治区巴林右旗
培养基:酪蛋白胨 10.0g,牛肉膏 10.0g,酵母粉 5.0g,葡萄糖 5.0g,乙酸钠 5.0g,柠檬酸二铵 2.0g,Tween 80 1.0g,K2HPO4 2.0g,MgSO4.7H2O 0.2g,MnSO4.H2O 0.05g,CaCO3 20.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH6.8。
培养温度:37℃
资源保藏类型:培养物
保存方法:真空冷冻干燥法
实物状态:有实物
共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享
源数据主键:20276
用途:研究;生产;生产酸性稀奶油。
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)

二、培养条件 
1、耐酸乳杆菌培养基:有害片球菌培养基(建议购买使用成品培养基)
2、培养基成分:酪胨 10g 牛肉粉 8g 酵母粉 5g 葡萄糖 20g 硫酸镁 0.2 g 乙酸钠 5g 柠檬酸三铵 2g磷酸氢二钾 2g硫酸锰 0.05 g 吐温80 1g半胱氨酸盐酸盐 0.5g蒸馏水 1000mLpH值5.2。
3、培养温度:30℃
4、培养时间:48-72h
 
三、培养方法
1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。
2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。
上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:
a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。
b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。
c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。

四、注意事项 
1、复苏后,微生物菌种应保藏于建议的温度、清洁和干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退。
2、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我司不负责任。
3、使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

五、保存方法
1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。
2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
3、悬液保存法:
①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。
5、常用的冷冻保存法:
①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。
③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。

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