MEF P3细胞培养Protocol
MEF细胞铺制：
一. 作为【小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS 细胞】用饲养层时的使用方法：
1,在T25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱中至少放置15 min以上。
2,吸除0.2%明胶，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一个T25培养瓶中约加入5 ml MEF完全培养液。
3,按实验需要：mES使用KM-r P3 MEF；小鼠iPS使用ICR-r P3 MEF或都使用CF-1-r P3 MEF，复苏MEF细胞若干支。将冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取4,出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。
5,将冻存管内细胞悬液转移至含2 ml MEF完全培养液的15 ml离心管内，以 1000 rpm，离心5 min，离心后将上清液吸除，按照MEF细胞说明书上建议的复苏培养体系，另加入新鲜的MEF完全培养液2 ml，重悬后平均加入到T25培养瓶中，轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱培养。24 h以后可以传入小鼠胚胎干细胞或小鼠iPS细胞。
二. 作为【人胚胎干细胞】用饲养层时的使用方法：
1,在T25培养瓶中加入5%Matrigel，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱至少放置30 min以上。
2,吸除Matrigel，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一个T25培养瓶中加入5 ml MEF完全培养液。
3,按实验需要复苏CF-1-r P3 MEF若干支。将冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。
4,将冻存管内细胞悬液转移至含2 ml MEF完全培养液的15 ml离心管内，以 1000 rpm，离心5 min，离心后将上清液吸除，按照MEF细胞说明书上建议的复苏培养体系，另加入新鲜的MEF完全培养液2 ml，重悬后平均加入到T25培养瓶中，轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱培养。24 h以后可以传入人胚胎干细胞。