MEF P0细胞培养Protocol
复苏：
1,将MEF P0细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台2,内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。
3,将冻存管内细胞悬液转移至含3-4 ml MEF完全培养液的15 ml离心管内，以1000 rpm,离心5 min。
4,离心后将上清液吸除，另加入新鲜的MEF完全培养液2 ml，吹打悬浮。
5,轻轻吹打，制成单细胞悬液，尽量避免气泡。
6,按照MEF细胞说明书上建议的复苏培养体系转移至1个T75培养瓶中培养，加入培养液14 ml。
7,放入37℃培养箱内培养。
复苏第二天观察，如死细胞较多，更换新鲜的MEF完全培养液，可以使细胞生长的更好。
传代：
1,待细胞长到90%-100%满时进行传代，一般3-4天，具体视细胞生长情况而定。
2,吸除废液。
3,用PBS（不含钙镁离子）轻轻冲洗一遍。
4,加入2.5 ml的0.25%胰酶（含EDTA）至培养瓶，轻轻晃动，使胰酶覆盖底面，置于37℃5,培养箱内消化细胞。
6,在显微镜下观察，直至细胞层全部脱落（一般需要1-2 min）。
7,加2.5 ml MEF完全培养液终止消化。
8,多次轻轻吹打细胞，制成单细胞悬液。
9,按照1:2-1:3的比例进行传代。
10,放入37℃培养箱内培养。
冻存：
1,按传代的方法将细胞消化下来，制成细胞悬液。
2,以1000 rpm，离心5 min，弃上清，逐滴加入已经预冷的冻存液，悬浮细胞。
3,按每支冻存管内加入500 ml细胞悬液分装到冻存管内，标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。
4,将冻存管置于程序降温盒内，-80℃过夜，转入液氮。
冻存液配方：
MEF完全培养液80%，FBS10%，DMSO 10%