细胞培养常见问题解答_技术提供_微生物菌种查询网-ATCC,菌种,质粒,细胞系

微生物菌种查询网 / 2015-03-11 14:08:50

细胞培养常见问题解答

培养液 pH 值变化太快

可能原因：1，CO2 张力不对。

2，培养瓶盖拧得太紧。

3，NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足。,

4，培养液中盐浓度不正确

5，细菌、酵母或真菌污染

建议解决方法：1）按培养液中 NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到 3.7g/L 浓度 NaHCO3 对应 CO2 浓度为 5％到 10％。

2）改用不依赖 CO2 培养液。

松开瓶盖 1/4 圈。

3）加 HEPES 缓冲液至 10 到 25mM 终浓度。

在 CO2 培养环境中改用基于 Earle′s 盐配制的培养

液，在大气培养环境中培养改用 Hanks 盐配制的培养

液。

4）丢弃培养物。

5）或用抗生素除菌。

可能原因：1，培养液出现沉淀，但pH值不变

,2，用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来,

3，可能原因：冰冻保存培养液用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。

将培养液加热到 37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，

丢弃培养液。

培养细胞死亡

可能原因：1，培养箱内无 CO2,2，培养箱内温度波动太大,3，细胞冻存或复苏过程中损伤,4，培养液渗透压不正确,5，培养液种有毒代谢产物堆积,6，检测培养箱内 CO2

建议解决方法：1）检查培养箱内温度

2）取新的保存细胞种

3）检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受

4）渗透压为 260 – 350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。

5）换入新鲜培养液

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