真空冷冻干燥法如何保藏克氏库克菌
简单的说真空冷冻干燥法就是将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。
下面就来看一下真空冷冻干燥法如何保藏克氏库克菌：
1、先要检验菌种的纯度。将克氏库克菌在营养丰富且容易增菌的培养基上进行培养为宜;菌龄以达到对数生长期为好;若未有芽孢或孢子的微生物，则以芽孢和孢子形成以后进行保存为好;菌液浓度以高为好。
2、准备安瓿管
安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。
3、保护剂的选择和准备
配制保护剂时，应注意其浓度及pH值，以及灭菌方法。如血清，可用过滤灭菌；牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，一般在100℃间歇煮沸2-3次，每次10-30分钟，备用。
4、 冻干样品的准备
在最适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期，进行纯度检查后与保护剂混合均匀，分装。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于108-1010个/ml为宜。采用较长的毛细滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物，应离心去除培养基，然后将培养物与保护剂混匀，再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。
5、 预冻
一般预冻2小时以上，温度达到-20℃到-35℃左右。
6、 冷冻干燥
采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。
将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。
7、 真空封口及真空检验
将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。
熔封后的干燥管可采用高频电火花真空测定仪测定真空度。
8、保藏
安瓿管应低温避光保藏。
最后一项就是质量检查：从冷冻干燥后的菌种中抽取若干支安瓿管进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等等。
Kocuria kristinae (Kloos et al.) Stackebrandt et al. 拉丁名
(ATCC? 27572?) 统一编号
Deposited As Micrococcus kristinae Kloos et al.
Strain Designations 别名 AW 204
Application 用途 Characterization
Isolation 分离源 Human skin
Biosafety Level 生物安全等级 1
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
Product Format 提供形式 freeze-dried
Preceptrol? no
Type Strain 模式菌株 no
Medium 培养基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient broth
Growth Conditions 生长条件
Temperature 培养温度 : 30.0°C
Name of Depositor 寄存者 WE Kloos
References 参考文献 Kloos WE, et al. Isolation and characterization of micrococci from human skin, including two new species: Micrococcus lylae and Micrococcus kristinae. Int. J. Syst. Bacteriol. 24: 79-101, 1974.