细胞冻存
1. 配置冻存培养基,与2℃-8℃下储存,直至使用;注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系;
2. 冻存贴壁细胞时,利用传代(详细步骤参考细胞传代)时所用方法轻柔的使细胞从组织培养容器上脱离下来;用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞;根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量;
3. 以约200×g的离心力将细胞悬液离心3-5分钟;在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀;
4. 用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度;
5. 将细胞悬液分装到若干冻存管中;分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态;
6. 使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约减低1℃;或将装有细胞的冻存管放入Nalgeng细胞冻存盒中,然后将冻存盒置于-80℃条件下过夜;
7. 将已经冷冻的细胞转移到液氮罐中储存。
8. 没有上述条件的实验室,亦可按下列顺序依次降温;室温→4℃ 30min→20℃ 30-60min→80℃过夜→液氮保存。