实验室制备基础培养基的材料准备与具体步骤及注意事项！
小杨 / 2025-11-20 10:22:17
百欧博伟生物：实验室制备基础培养基（以最常用的营养琼脂培养基和营养肉汤培养基为例）的步骤如下，适用于大多数营养要求简单的细菌（如
大肠杆菌、
葡萄球菌等）。
一、营养琼脂培养基（固体，用于细菌分离、纯化、菌落观察）
1、材料准备
配方（1000mL）：
蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化钠 5g、琼脂 15-20g、蒸馏水 1000mL（pH 调至 7.2-7.4）。
仪器：电子天平、烧杯、玻璃棒、容量瓶、pH 试纸（或 pH 计）、高压蒸汽灭菌锅、锥形瓶、试管、灭菌平皿等。
2、具体步骤
（1）称量与溶解
按配方准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠，放入烧杯中，加入约 800mL 蒸馏水。
用玻璃棒搅拌，加热至完全溶解（牛肉膏较黏稠，需小火加热并搅拌，避免糊底）。
加入琼脂，继续加热搅拌至琼脂完全溶解（琼脂需煮沸才能溶解，过程中可能蒸发水分，可补加蒸馏水至接近 1000mL）。
（2）定容与调 pH
将溶液转移至 1000mL 容量瓶中，加蒸馏水定容至 1000mL，混匀。
用 1mol/L NaOH 或 1mol/L HCl 调节 pH 至 7.2-7.4（用 pH 计精确测量，或用广泛 pH 试纸粗略判断）。
（3）分装
将溶液分装至锥形瓶（约占瓶容积的 1/3，避免灭菌时溢出），或直接分装至试管（如需制作斜面），瓶口用棉塞或硅胶塞密封，外包牛皮纸。
（4）灭菌
高压蒸汽灭菌：121℃、103.4kPa（1.05kg/cm²），灭菌 15-20 分钟。
灭菌后取出，若分装至试管，可趁热倾斜试管（形成斜面，斜面长度约为试管长度的 1/2）；若为锥形瓶，待冷却至 50-60℃（手感不烫手）时倒平板。
（5）倒平板
无菌操作：在超净工作台中，打开灭菌平皿，将锥形瓶中的培养基倒入平皿（每皿约 15-20mL），盖好皿盖。
待培养基凝固后（约 30 分钟），倒置平皿（防止冷凝水滴落污染菌落），4℃冰箱保存备用（可存放 1-2 周）。
二、营养肉汤培养基（液体，用于细菌增菌、生化试验或纯培养）
1、材料准备
配方（1000mL）：
蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化钠 5g、蒸馏水 1000mL（pH 调至 7.2-7.4）。
仪器：与营养琼脂相同（无需琼脂，无需倒平板步骤）。
2、具体步骤
（1）称量与溶解
称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠，加入 800mL 蒸馏水，搅拌加热至完全溶解（无需加琼脂，溶解更简单）。
（2）定容与调 pH
定容至 1000mL，调节 pH 至 7.2-7.4（同固体培养基）。
（3）分装与灭菌
分装至试管或锥形瓶（液体高度约为容器的 1/3），灭菌条件：121℃、20 分钟。
灭菌后冷却至室温，4℃保存备用（可存放 1-2 周）。
三、关键注意事项
1、无菌操作
培养基灭菌后倒平板、分装时需在超净工作台中进行，避免杂菌污染。
灭菌后的培养基若发现浑浊、沉淀或颜色异常，应丢弃重配。
2、pH 调节
灭菌后培养基 pH 会略有下降（约 0.2-0.3），因此灭菌前 pH 可略高 0.2（如目标 7.2，灭菌前调至 7.4）。
对 pH 敏感的细菌（如
乳酸菌），需精确控制 pH（用 pH 计测量）。
3、琼脂用量
琼脂用量决定培养基硬度：固体培养基用 1.5%-2% 琼脂，半固体培养基用 0.3%-0.5% 琼脂（用于观察细菌动力）。
4、特殊处理
若培养基含热不稳定成分（如血清、抗生素），需先灭菌基础培养基，冷却至 50℃左右时再无菌加入（即“过滤除菌”后添加）。
通过以上步骤，可制备出满足基础细菌培养需求的培养基。若需培养苛养菌，可在此基础上添加血清、血液等成分（如血琼脂 = 营养琼脂 + 5%-10% 脱纤维羊血，灭菌后冷却至 50℃时加入血液混匀倒平板）。
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