A-72犬癌细胞收到后的培养步骤与注意事项有哪些？
小杨 / 2024-03-22 08:50:14
一、细胞简介
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：A-72
细胞数量：1*10^6
组织来源：--
形态特征：--
生长方式：贴壁
背景描述：--
培养条件：89%1640+10%FBS+1%双抗
换液频率：--
传代比例：--
冻存液配方：90%FBS+10%DMSO
安全性：BSL-1
供应限制：仅供科研
运输方式：常温运输（T25培养瓶）
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、细胞接受后处理方法
1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。
4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
三、细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液 加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面 T25 瓶为类；
1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO ，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、细胞培养注意事项
1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确 认后我们为您再免费寄送一次。
4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80% 左右时正常传代。
5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 我们技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7、该细胞仅供科研使用。
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