中国仓鼠肺成纤维细胞的应用及培养操作！
小杨 / 2024-02-22 08:58:14
一、背景
V79是一种来自中国仓鼠肺部的成纤维细胞系，被广泛用于生物医学研究，特别是在细胞生物学、遗传学、毒理学和放射生物学等领域。这些细胞具有贴壁生长的特性，可以在适当的培养基中迅速繁殖。
由于其较高的繁殖能力和对培养条件的适应性，
V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞经常被选作实验室研究的模型系统。在细胞生物学研究中，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞可用于研究细胞周期、细胞分裂、细胞凋亡等基本生物学过程。在遗传学和基因工程研究中，这些细胞可用于基因转染、基因敲除和基因表达调控等实验。在毒理学研究中，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞可用于评估化学物质、药物、辐射等外界因素对细胞的毒性作用。在放射生物学研究中，V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞对辐射的敏感性使其成为研究辐射损伤和修复机制的理想模型。
此外，
V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞还可用于药物筛选和细胞治疗等应用研究。例如，在药物筛选中，V79细胞可用于测试新药物的细胞毒性、抗增殖作用或细胞保护作用。在细胞治疗中，尽管V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞本身不是用于治疗目的的细胞类型，但它们可以作为细胞培养的饲料层或共培养系统来支持其他细胞类型的生长和分化。
1)复苏V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
选取PM2.5中矿物主要成分方解石、钠长石、石英、绢云母等粉尘，将四种矿物粉尘分别作用于中国仓鼠肺细胞（Chinese Hamster LungCell，V79细胞），研究其对细胞产生的毒性作用，探讨其产生毒性作用的相关机制。
方法：
（1）采用X射线荧光光谱分析法测定原矿物样品化学组成，经激光粒度分析仪分析四种矿物粉尘粒径分布。
（2）实验组选取处于对数生长期的V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞，调整细胞浓度后分别加入50、100、200、400μg/ml的四种矿物粉尘悬液，设置阴性对照组加入相同剂量的细胞培养液，继续培养24h后。用噻唑蓝（MTT）实验检测细胞增殖情况，比较各组细胞的存活率。
（3）瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色，油镜下观察各组细胞形态改变，计数微核细胞千分率。
（4）彗星实验（SCGE）检测各组细胞DNA的损伤程度。每种浓度随机选取100个细胞彗星图像，CASP彗星分析软件分析彗星图像，以尾矩(OTM)作为分析指标。
（5）直线相关分析方法分析V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞存活率同微核率、尾矩（OTM）值相关性。
（6）酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞上清液中白细胞介素-6（IL-6）含量，分析矿物粉尘产生毒性作用的相关机制。
结果：
（1）实验所选用矿物粉尘石英、绢云母、钠长石的化学组成成分中所含二氧化硅（SiO2）含量最高，而矿物粉尘方解石所含氧化钙（CaO）含量最高；四种矿物粉尘经检测其平均粒径均<2.5um，符合实验要求。
（2）同对照组相比较，四种矿物粉尘均能影响V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞存活率，随矿物浓度的增高，细胞存活率降低，细胞存活率与矿物粉尘的浓度呈现剂量-效应关系；与矿物钠长石、方解石相比较，矿物石英、绢云母导致细胞存活率下降更加明显。
（3）随着四种矿物粉尘浓度的增加，细胞微核率均有增加，其微核率从大到小顺序为：绢云母＞石英＞钠长石＞方解石。各粉尘组在400ug/ml的高浓度时，其微核率同阴性对照组比较，均具有统计学意义（P<0.05），钠长石、石英和绢云母三种矿物在此浓度的细胞微核率与阴性对照组更是有显著统计学意义（P<0.01）。
（4）四种矿物粉尘对V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞的DNA损伤呈现剂量-效应关系，矿物粉尘浓度越高，DNA损伤越明显。钠长石、石英和绢云母高浓度暴露组的细胞OTM值与阴性对照组比较，具有统计学意义（P<0.05）。
（5）暴露在不同矿物粉尘中的细胞存活率的变化同细胞微核率的变化均呈现负相关，细胞存活率的变化同细胞OTM值的变化同样均呈现负相关。
（6）四种矿物粉尘均能使V79（中国仓鼠肺成纤维细胞）细胞培养液上清液中的IL-6含量升高，其中石英和绢云母暴露组浓度升至100μg/ml及以上，其IL-6含量与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
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