枝顶孢霉PCR试剂盒的应用与影响及研究结果！
小杨 / 2024-01-10 08:48:13
一、背景
枝顶孢霉PCR试剂盒是一种专门用于检测枝顶孢霉的生物试剂盒。
枝顶孢霉是一种真菌，可引起多种疾病，包括皮炎、角膜炎和尿路感染等。使用PCR试剂盒可以快速、准确地检测出枝顶孢霉，对于感染控制和疾病诊断具有重要意义。
枝顶孢霉PCR试剂盒通常由一对特异性引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs等成分组成。通过PCR反应，可以特异性地扩增枝顶孢霉的DNA片段，从而对其进行快速检测。使用这种试剂盒的操作过程相对简单，只需将样品DNA加入到PCR反应液中，经过一系列温度变化和反应后，即可得到检测结果。
枝顶孢霉PCR试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断、食品检测、环境监测等领域。然而，需要注意的是，PCR技术虽然具有高灵敏度和特异性，但也可能受到其他因素的干扰，如DNA提取效率、引物设计等。因此，在使用PCR试剂盒时，需要严格按照操作说明进行，并对结果进行仔细的分析和解释。
1、样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。
2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。
3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。
4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。
5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在枝顶孢霉的感染。
三、应用
以西州蜜25号甜瓜为试材,分离和鉴定导致鲜切甜瓜腐败的主要真菌及测定其致腐能力;通过短波紫外线照射,了解不同剂量照射对鲜切甜瓜品质的影响并得出最适照射剂量;采用最适剂量UV-C处理,研究其对鲜切甜瓜的次生代谢及活性氧代谢的影响,从而为UV-C处理对鲜切甜瓜的保鲜提供理论基础。
主要研究结果如下：
(1)使用稀释平板法、三点法对鲜切甜瓜中腐败真菌进行分离纯化,真菌基因组DNA试剂盒提取其DNA,枝顶孢霉PCR试剂盒PCR扩增后进行凝胶电泳实验并测出DNA序列。通过形态学及枝顶孢霉PCR试剂盒分子生物学鉴定出鲜切甜瓜主要腐败真菌有8种,其中霉菌有6种,按其致腐能力由大到小排列,分别为赭曲霉(Aspergillus ochraceus)、球状枝孢霉(Cladosporium sphaerospermum)、葡萄茎枯病菌(Didymella glomerata)、核生枝顶孢霉(Acremonium sclerotigenum)、褶皱曲霉(Aspergillus rugulosus)、萨氏曲霉(Aspergillus sydowii),酵母有2种,分别为大隐球酵母(Cryptococcus magnus)和粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。
(2)分别使用0、2.2、4.4、6.6 kJ/m2的UV-C照射鲜切甜瓜,在0、4、8、12 d取样,通过对品质指标的检测,筛选最适剂量并研究营养品质。
结果表明：6.6 kJ/m2的UV-C处理可较好的维持鲜切甜瓜的硬度、可溶性固形物含量、重量,使其保持原有的颜色、降低相对电导率、在贮藏初期抑制其呼吸强度,减少鲜切甜瓜的菌落总数及枝顶孢霉PCR试剂盒霉菌酵母数,与空白对照(Control check,CK)相比货架期增加2 d。6.6 kJ/m2处理组对鲜切甜瓜蔗糖、果糖、葡萄糖、三种有机酸含量无明显影响(P>0.05),但在贮藏后期可刺激抗坏血酸含量升高(P<0.05)。
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