气单胞菌属的分类与鉴定及致病性与检测方法!
小杨 / 2022-11-23 08:57:35


一、背景

气单胞菌属为弧菌科(Vi-brio)中的一类革兰氏阴性短杆菌。生存于江河或沿岸的海水中,是鱼类的重要病原菌,亦可引起人畜的偶发性感染,致肠道疾病或食物中毒。菌体呈直杆状,两端钝圆,(0.3~1.0)×(1.0~3.5)微米,单在或成双。通常单极生鞭毛运动,固体培养基幼龄培养物可形成周生鞭毛(杀鲑气单胞菌无鞭毛,不能运动),兼性厌氧,葡萄糖代谢呼吸型兼发酵型,分解碳水化合物产酸或产酸产气 (CO2及H2),化能有机营养,利用糖和有机酸作为碳源。

还原硝酸盐为亚硝酸盐,氧化酶阳性,接触酶阳性。普通培养基及麦康凯琼脂生长良好。抗制弧菌剂O/129(2,4二胺基-6,7二异丙基喋啶)。氧化酶阳性,多种糖和有机酸可用作碳源;利用葡萄糖可产酸(产气或不产气),但利用肌醇时则不产气;多数不发酵乳糖。可形成明胶酶、DNA酶、RNA酶和酯酶。硝酸盐还原为阳性。

生长不需NaCl。营养要求不高,多数可在营养琼脂或胰 胨大豆琼脂上。G+Cmol%值为57~63。已知菌有23种,模式种为嗜水气单胞菌(A.hydrophila)。气单胞菌有广泛的致病性,能感染鱼类、禽类和哺乳类,导致皮肤溃疡等局部感染或败血症。是水生动物尤其是鱼类的常见致病菌,引起鱼的疖点病、红瘟病或红口病,在水温高时可暴发流行。也可感染人类,使之患脑膜炎、败血症和急性肠胃炎等。

气单胞菌在水环境中普遍存在,仅其中具毒力因子的菌株才有致病性。毒力因子如毒素(HEC毒素或气溶素类穿孔毒素)、蛋白酶、粘附素(S蛋白、菌毛、外膜蛋白等)和铁载体等。

二、分类

该菌属可分为两个群:①嗜冷无动力群,代表种是杀鲑气单胞菌(A. salmonicida),根据生化特征可分为杀鲑亚种(A.salmonicida subsp. salmonicida)、无色亚种(A.salmonicida subsp.achromogenes)及杀鳟亚种(A.salmonicida subsp.mosoucida)。杀鲑亚种产生水溶性棕色色素,不产生吲哚,区别于另两个亚种。最适生长温度22~25℃,37℃不生长,在普通培养基上生长良好,在血琼脂平板上迅速溶血。

杀鲑气单胞菌血清型一致。自然条件下为严格寄生菌,表面A蛋白为毒力因子,产生杀白细胞毒素,致鲑等淡水养殖鱼肠炎、疖疮病、败血症,金鱼的“腐皮病”及鲤鱼的“红皮病”,对人畜无致病性。②嗜温有动力群,包括嗜水气单胞菌(A.hydrophila)和豚鼠气单胞菌(A.caviae)。最适生长温度为28℃,37℃亦可生长。

嗜水气单胞菌广泛存在于淡水及含有机物的水、淤泥及淡水鱼类的体表,可致鳗“红鳍病”、鲤鱼“红斑病”及金鱼“坚鳞病”等鱼类疾病,亦可致水貂出血性败血症,并为牛、猪、水貂胃肠炎的病原,引起人的急性腹泻或创伤感染。致病因子有β溶血素和肠毒素。

三、鉴定

气单胞菌鉴定到种比较困难,传统的鉴定方法依生化反应在弧菌科内分为6 组,但生化反应多有重叠,难以明确划分,鉴定的试验方法也不一致。商品化的鉴定装置能鉴定的菌种有限,其结果与传统的方法不尽一致,但传统的鉴定方法未能包括新的菌种。最近有研究收集了14 个菌种共193 株气单胞菌,全面地观察其生化反应(包括药敏试验在内的53 项试验),分别记录其典型的和非典型的表型特征,在此基础上提出新的鉴别方案。

此鉴定方案应用Moeller′s 赖氨酸脱羧酶(ly sinedecarboxylase ,LDC )、鸟氨酸脱羧酶(o rni thinedecarboxylase ,ODC)和精氨酸双水解酶(argininedihydrolase ,ADH)将气单胞菌分为5 个表型组。

1组:只ODC 为阳性者:维氏气单胞菌维氏生物型、异常嗜糖气单胞菌。2 组:LDC 阳性,ADH 阳性(偶有阴性):嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌温和生物型、简氏气单胞菌、舒氏气单胞菌、脆弱气单胞菌、异常嗜糖气单胞菌。3 组:LDC 、ODC 、ADH 均为阴性者:嗜水气单胞菌、中间气单胞菌、A .eucrenophilia 。4 组:只ADH 阳性者:豚鼠气单胞菌、中间气单胞菌、A .bestiarumA .eucrenophilia 、鳗气单胞菌、波氏气单胞菌。5 组:LDC 和ADH 可阳性或阴性者:杀鲑气单胞菌、A .bestiarum 。

四、致病性

气单胞菌属(Aeromonas)到目前已扩展到包括嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophil)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、 温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)、中间气单胞菌(Aeromonas media)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、简氏气单胞菌(Aeromonas jandaei)等l4个气单胞菌表型种和16个基因种,其模式种为嗜水气单胞菌,豚鼠气单胞菌是极常见的气单胞菌。 气单胞菌属细菌在临床和环境中都分布很广,水、土壤、空气中都有分布。

气单胞菌属细菌引起的水产养殖动物疾病种类繁多,不仅给水产养殖业带来严重的经济损失,还可通过水产动物和水产品感染人畜,导致人畜腹泻和食物中毒,影响人类健康。气单胞菌属可以引起人类的肠外感染和肠内感染,前者包括败血症、创伤、胆囊炎,眼、关节、肺部、腹腔内及全身性的感染等,患者常有免疫功能低下;后者主要表现为肠胃炎。临床常见的气单胞菌属包括嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和维氏气单胞菌温和亚种(也被命名为温和气单胞菌)。

五、检测方法

在我国,目前仅制定了嗜水气单胞菌的检测方法(GB/T18652-2002),而对气单胞菌属的标准检测鉴定方法尚未建立。部分地区制定了方法不一的气单胞菌初筛技术方法,但是存在对某些生化不典型菌株(如乳糖阳性或甘露醇阴性等)的错误鉴定。国外专业实验室通过基因测序的方法鉴定气单胞菌,但该技术需依赖分子诊断实验室的仪器配置,这对大多数国内基层实验室来说存在软件或硬件不足。

基于目前全球食品安全和国内持续上升的食源性疾病防控形势,众多相关领域的实验室,包括临床、公共卫生、质检、出入境和动物兽医等实验室对各领域的筛检样品中可疑气单胞菌需要有更加专业的认识和鉴别能力,以及更加简便、精确的鉴定方法,才能避免错误的鉴定,从而在多源头有效的控制气单胞菌疫情的传播和扩散。有研究开发了一种气单胞菌属细菌的检测方法,包括如下步骤: 

a,提取样本DNA:提取待检样本中的DNA; b,基因扩增:用权利要求1所述的试剂盒对待检样本中的DNA进行扩增; c,结果检测:对DNA扩增结果进行检测。 

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