一、细胞简介
平台编号：Bio-73213
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：EA.Hy926
细胞名称：EA.hy926（人脐静脉细胞融合细胞）
种属：人
组织来源：脐静脉/体细胞杂交
细胞类型：杂交瘤细胞
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
背景描述：EA.hy926细胞是在PEG胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫鸟嘌呤的A549克隆株融合，构建的一株人脐静脉细胞株。融合子在HAT培养基上生长，并以Ⅷ因子相关抗原筛选，EA.hy926细胞已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示，Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器，分化的内皮细胞特性如血管生成，体内平衡-血栓形成，血压及炎症反应。
生长培养基：DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
用途：(STR鉴定正确)
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、细胞特性
1)培养组织来源于实验动物的正常眼组织。
2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。
三、细胞的运输和保存
培养视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
可以重发的情况有哪些？
（1）培养细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
（5）视具体情况而定。
出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）培养客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）细胞状态不好，未细胞培养前3天照片的，不重发；
（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；
四、注意事项
（1）冻存前细胞状态，细胞最好在对数生长期，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；
（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。
（3）消化和吹打，切忌胰酶消化过度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。
（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。
（5）关于“慢冻”，传统的方法，LLC细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，推荐使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
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