弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的应用！
小杨 / 2021-05-27 09:03:49
一、背景
弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞是来源于弥漫大B细胞淋巴瘤患者血液、淋巴组织的贴壁细胞系，主要用于体外弥漫性大B细胞淋巴瘤的研究。
弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是成人淋巴瘤中最常见的一种类型，在临床表现和预后等方面具高度异质性。
弥漫性大B细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的一种，也是成人最常见的淋巴系统肿瘤，主要指的是细胞核大于2个正常淋巴细胞的大B细胞构成的，伴有弥漫生长的肿瘤。常见的临床症状，就是无痛性、进行性淋巴结肿大和结外肿块，这是典型的弥漫大B的临床表现。
常常伴有发热、乏力和盗汗。另外，40%的肿瘤原发于结外，最常见累及的部位是胃肠道，其他部位也常常发生。但是，原发于骨髓或者直接累及血液的比较少。肿块生长比较迅速，肿块可以在相应部位引起压迫症状，随着病情的发展，常发生扩散。
二、弥漫大B细胞淋巴瘤细胞传代步骤：
将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。
往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（每次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完全培养基终止消化。
用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
三、应用
用于长链非编码RNA HULC在眼眶弥漫性大B细胞淋巴瘤中的作用及机制研究：
1、检测HULC和miR-29c-5p在眼眶DLBCL组织中的表达情况。
2、研究HULC敲除和HULC-miR-29c-5p axis对DLBCL细胞增殖、侵袭、凋亡以及MAPK/ERK信号通路的影响。
3、进一步研究HULC敲除对DLBCL移植瘤生长以及移植瘤中miR-29c-5p表达、细胞增殖、MAPK/ERK信号通路的影响。
方法：1、HE染色观察眼眶弥漫性大B细胞淋巴瘤的病理组织形态特征。
2、利用qRT-PCR检测HULC和miR-29c-5p在眼眶DLBCL组织中的表达情况。
结果：1、HE染色发现眼眶弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中肿瘤细胞弥散分布,体积大,呈圆形,核大,嗜碱性染色,核分裂像多见。
2、与癌旁正常组织与反应性淋巴增生组织相比,在眼眶DLBCL组织中HULC表达明显上调,miR-29c-5p表达明显下调。
HULC对DLBCL细胞生物学功能的影响及分子机制方法：
1、构建pLenti-sh-HULC、pLenti-HULC以及pLenti-miR-29c-5p慢病毒载体。将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和滴定,之后进行病毒感染Pfeiffer细胞,经筛选得到稳定转染细胞系。
2、CCK-8、Transwell、流式细胞术实验检测Pfeiffer细胞增殖、侵袭以及凋亡情况。
3、利用Western blot检测Pfeiffer细胞中MAPK/ERK信号通路相关蛋白p-MEK1/2、p-ERK的表达情况。
4、利用qRT-PCR检测HULC和miR-29c-5p在外周血单个核细胞（PBMC细胞）和Pfeiffer细胞中的表达情况。
5、生物信息学预测能与HULC结合的miRNA。双荧光素酶报告基因实验验证HULC与miR-29c-5p的关系。