木醋杆菌产纤维素条件的研究
小李 / 2020-11-09 08:35:53


木醋杆菌ITS序列分析及产纤维素条件的研究
木醋杆菌(Acetobacter xylinum)是合成纤维素能力最强的细菌,设计木醋杆菌16S-23SrDNA转录间隔区(internally transcribed spacer ITS)序列引物,对其扩增。在GenBank上的登陆号为GenBank EU196159。选择到合适的木醋杆菌ITS扩增引物,PCR扩增条件。木醋杆菌最佳培养温度28℃,通过测定纤维素产量发现最佳接种量5%,最佳碳源为葡萄糖,最佳碳源浓度为2.5%。

木醋杆菌M096生产细菌纤维素的发酵条件
探讨温度、初始pH值、碳源和氮源对细菌纤维素产量的影响,以确定生产菌株发酵生产细菌纤维素的条件。结果显示,木醋杆菌M096发酵生产细菌纤维素的培养条件是:发酵温度25℃,初始pH值最适范围是5.8～6.6,最佳碳源为蔗糖且最适浓度是8%,最佳氮源为牛肉膏且最适浓度是1.5%。

木醋杆菌合成培养基探索 
通过逐一删减法对参考合成培养基进行简化,结果显示2%葡萄糖,0.3%Na2HPO4、0.1%NH4Cl、0.1%柠檬酸、0.025%MgSO4适合木醋杆菌HN001,再进一步对该培养基进行优化,实验结果显示3%蔗糖、0.1%乙酸、0.1%乙酸铵(或柠檬酸铵)、0.1%Na2HPO4、0.025%MgSO4为最佳合成培养基组成,而KCl和烟酰胺对纤维素的产生有抑制作用。

霉素B抗性基因在木醋杆菌中的整合表达
以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传代稳定,潮霉素抗性有了较大的提高,从100μg/mL提高到了400μg/mL以上,而产纤维素能力只略有下降。






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