人子宫内膜腺癌细胞的应用与研究方法！
小杨 / 2020-07-09 08:38:47
一、背景
人子宫内膜腺癌细胞源自一名64岁白人女性的子宫内膜肿瘤组织，由GRRichardson于1984年建系。细胞染色体为非整倍体，数目范围在51-66之间。裸鼠植瘤后，其肿瘤标本在电镜下显示，细胞间见紧密相连，细胞表面具有微绒毛。其形态特征与孕激素刺激后的子宫内膜相似。
二、人子宫内膜腺癌细胞培养的操作步骤
1、吸走培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
2、吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；
（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）
3、加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；
4、将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；
传代比例:不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
三、人子宫内膜腺癌细胞的应用
用于RbAp48通过Wnt/β-catenin信号通路调控子宫内膜腺癌细胞的增殖迁移侵袭研究：
子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)又称为子宫体癌,常见于围绝经期及绝经后老年女性,在临床诊治中主要以来自于子宫内膜腺体的腺癌最为常见,故又广泛的被统称为子宫内膜样腺癌。
RbAp48(retinoblastoma binding protein 4)是一种与多种疾病相关的核表达蛋白。RbAp48作为多种染色质装配、重塑和核小体修饰复合物的组分,可通过改变染色体及组蛋白的构象,直接调控多种有关细胞增殖分化基因的转录或直接与某种转录因子相结合(E2F、CREB、NF-κB、ER等)通过改变其活性影响基因的转录表达。
四、研究方法
1、免疫组化(IHC)检测RbAp48及β-catenin在子宫内膜癌灶及配对癌旁组织中表达情况。
2、建立RbAp48的慢病毒干扰序列感染KLE、Ishikawa细胞,建立其低表达子宫内膜腺癌细胞系(KLE、ISK)。
3、检测慢病毒介导形成的RbAp48低表达细胞系(KLE、ISK)增殖能力的变化。
4、检测慢病毒介导形成的RbAp48低表达细胞系(KLE、ISK)迁移及侵袭的能力的变化。
5、探索下调RbAp48蛋白与子宫内膜腺癌细胞上皮-间质转化之间(EMT)的关系。
6、构建RbAp48低表达的裸鼠荷瘤模型,模拟体内子宫内膜腺癌细胞的生存环境进一步探究RbAp48表达在子宫内膜癌增殖的作用。
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