目前食用菌二、三级菌种的制作和金针菇、猴头菇等熟料栽培一般采用固体培养基,接种前都需要高压灭菌,而灭菌彻底与否是二、三级菌种制作和熟料栽培成功的关键,它还直接影响到菌种场的信誉和经济效益、食用菌栽培者的收入及食用菌栽培实践教学的顺利进行
1，主料预湿适宜
主料预湿是否适宜对灭菌效果有明显的影响。如预湿不透、不均匀时,主料少数呈干燥状态,湿热蒸汽就难穿透到干料中间,难达到彻底灭菌的目的。如预湿过度,会使培养基含水量过高,导致菌丝生长缓慢,甚至停止生长。如主料量少时,可把预湿过度的料,用手挤握至适宜的含水量,再拌入辅料。
2，灭菌前培养基中微生物的自繁生物量
培养基灭菌前,含有大量的微生物,当原材料处于干燥条件下,它们都呈休眠或半休眠状态。培养料一旦预湿,休眠或半休眠的微生物得到生长繁殖所需的水分,就恢复活性,迅速增殖。气温高时,若装料时间拉长或装完料未及时灭菌,细菌、酵母菌等则大量繁殖,使培养基酸败,灭菌难以彻底。因此,装袋(瓶)应尽可能快完成,装完后立即进行灭菌,从而控制灭菌前培养基中微生物的自繁生物量。
3，灭菌灶内料袋的排放方式
灭菌时,保证料瓶之间要有间隙，使湿热蒸汽能较好地在料瓶间隙之间循环,使料瓶受热均匀、灭菌彻底。近年来采用聚丙烯、低压聚乙烯薄膜袋入灶重叠堆积后,易受挤压,使料袋间的间隙被堵塞,灭菌时湿热蒸汽难以穿透,受热不均匀,不易达到彻底灭菌的效果。因此,可用木条、竹条或钢条制作成周转筐,再把料袋单排竖放进筐内,各筐叠放时应注意留有间隙,然后再进行灭菌,或直接把料袋排放成“井”字型以减少料袋间的挤压和增加料袋的间隙,以提高灭菌效果。
4，压力表头指示压力和温度相对应
无论采用何种型号、结构的高压灭菌锅灭菌,能否达到彻底灭菌的目的,关键在于压力表头指示的锅内压力与锅内的温度是否相对应。当锅内压力已达到灭菌所需的压力(如13.83×104Pa),而锅内温度未达到对应的温度(126℃)时,这种情况主要是由于锅内冷空气未完全排除所致,锅内的蒸汽实际压力并达不到表头的指示压力,导致灭菌不彻底。
5，培养基成分
油脂、糖类、蛋白质会增加微生物的耐热性,因为高浓度的有机物包裹在材料颗粒周围形成一层薄膜,影响热量的传递。如废棉含有油脂,灭菌时需适当提高灭菌压力或灭菌温度(14.71× 104Pa, 128℃ , 2h),而木屑或棉籽壳培养基则需14.71× 104Pa, 128℃ , 1～ 1.5h。常采用提高温度、缩短灭菌时间的办法来达到既灭菌彻底、又尽量减少营养成分损失的目的,因此在高压灭菌前,应掌握各种类型固体培养基灭菌所需的温度和时间。
6，培养基的pH值
pH值对微生物的耐热性影响很大。pH6～ 8时,微生物不易死亡; pH小于6时,氢离子极易侵入微生物细胞,改变细胞的生理反应,促进细胞死亡,所以,pH值低的培养基,在相同的压力下,所需灭菌时间可以适当缩短。但通过灭菌,培养基的pH值会降低0.2～ 0.3,因此配培养基时,应把pH值适当调高一点。
7，培养基的颗粒大小和孔隙度
培养基的颗粒越大,灭菌时蒸汽穿透颗粒所需要的时间越长,且颗粒在袋(瓶)内的孔隙度也越高,致使料袋(瓶)内空气量增加,而空气是不良的热传导介质,影响蒸汽的传导,所以麦粒、木粒、木条型的培养基灭菌需要的压力为14.71× 104Pa,保持2h以上才能灭菌彻底,因此用这些材料配制培养基时,通常填充些木屑、麸皮或稻草粉等以减少孔隙度。草料培养基具有一定弹性,孔隙度也较高,装料过程中需尽可能压实,保持14.71× 104Pa, 1.5h即可彻底灭菌。
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