血琼脂平板和巧克力平板的制备方法与操作流程有哪些区别？
小杨 / 2026-02-25 09:30:37
血琼脂平板（BA）和
巧克力平板（CA）的基础成分几乎一样，核心区别就在于“是否加热溶血”以及加热的温度和时间，这直接决定了最终的营养状态和用途。下面是两者的制备流程、关键差异和注意事项。
一、基础成分（两者基本相同）
基础琼脂：如胰酪大豆胨琼脂（TSA）、哥伦比亚琼脂等
动物血液：常用脱纤维羊血（也可用兔血、马血），终浓度一般 5%～10%
无菌蒸馏水/去离子水
巧克力平板并不是加了“巧克力”，只是加热后颜色像巧克力，本质还是血琼脂的“热处理版”。
目标：保持红细胞完整，用于观察溶血环。
配制基础琼脂
按说明书称取基础琼脂粉，加蒸馏水，搅拌溶解。
高压灭菌：121℃，15 min。
冷却至适宜温度
灭菌后取出，在水浴/室温冷却至 45～50℃（手感温热不烫手）。
这一步很关键：温度太高会直接把血烫破、变黑；太低琼脂开始凝固，倒不平。
无菌加入血液
在超净台内，无菌操作加入脱纤维羊血，轻轻摇匀（避免产生气泡）。
终浓度：一般 5%～10%（如 100 mL 琼脂 + 5～10 mL 血）。
倒平板
迅速倒入无菌平皿，每皿约 15～20 mL。
水平放置，待完全凝固。
保存与使用
凝固后倒置，2～8℃冷藏，一般 1～2 周内用完。
外观：鲜红色、透明、红细胞完整。
目标：红细胞破裂，释放更多 X、V 因子，支持苛养菌生长。
配制基础琼脂
同血琼脂：称粉→加水→溶解→121℃，15 min 高压灭菌。
冷却至稍高温度
灭菌后冷却至 50～60℃（比血琼脂稍高）。
加入血液并“加热溶血”
无菌加入脱纤维羊血，轻轻混匀。
关键步骤：
将含血琼脂置于 75～80℃ 水浴或加热板，维持 10～15 min，并轻轻摇动。
液体颜色会从鲜红 → 暗红 → 巧克力色/棕褐色，且变得半透明、清亮，说明红细胞已破裂。
注意：不要煮沸、不要过度加热，否则营养破坏、颜色过深。
冷却后倒平板
加热溶血后，冷却至 45～50℃。
无菌倒平板，水平放置凝固。
保存与使用
倒置，2～8℃ 冷藏，1～2 周内用完。
外观：巧克力色/棕褐色、半透明。
四、两者制备方法的核心区别
项目 血琼脂平板（BA） 巧克力平板（CA）
血液处理 不加热，保持红细胞完整 75～80℃ 加热 10～15 min，使红细胞破裂
颜色 鲜红色 巧克力色/棕褐色
透明度 红细胞完整，略浑浊 红细胞破裂，更清亮、半透明
关键温度控制点 加血温度：45～50℃ 加血后再加热到 75～80℃，再冷却到 45～50℃倒板
主要目的 培养 + 观察溶血（α/β/γ） 提供高营养，支持苛养菌（嗜血杆菌、淋球菌等）
红细胞状态 完整 破裂、释放内容物
五、操作中容易踩的坑（重要注意事项）
温度控制是灵魂
血琼脂：加血温度 >55℃ 会出现“自发溶血”，平板变褐，影响溶血观察。
巧克力平板：加热不足 → 红细胞没破，营养不够；加热过度 → 颜色发黑、营养破坏。
血液必须无菌、脱纤维
用脱纤维羊血，避免凝固；使用前检查有无溶血、污染。
摇匀方式
轻轻旋转/颠倒混匀，不要剧烈震荡，防止产生大量气泡，影响菌落观察。
倒板要快
尤其是巧克力平板，加热后温度下降快，久置会局部凝固，表面不平。
保存
两种平板都要冷藏、避光、防潮，避免反复冻融，否则溶血环不清晰或营养下降。
六、一句话记忆
血琼脂：不加温，保红细胞，看溶血。
巧克力：加热破红细胞，释放营养，养“挑食菌”。
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