蛋白胨山梨醇胆盐肉汤培养基的成分与作用原理及实验现象!
小杨 / 2026-01-13 09:33:53
蛋白胨山梨醇胆盐肉汤是一种选择性增菌培养基,主要用于
大肠埃希氏菌(尤其是致病性菌株如 O157:H7)的初步筛选与增菌,其核心设计围绕营养供给、选择性抑制、底物特异性反应三个层面。
一、培养基主要成分及作用原理
1、蛋白胨
作为核心氮源,提供细菌生长所需的氨基酸、多肽及维生素等营养物质,满足大肠埃希氏菌的增殖需求。
2、山梨醇
作为特异性碳源。绝大多数非致病性大肠埃希氏菌可以发酵山梨醇,产酸产气;而致病性
大肠埃希氏菌 O157:H7 缺乏山梨醇发酵酶,无法利用该碳源。这是区分致病性与非致病性菌株的关键底物。
3、胆盐
作为选择性抑制剂。胆盐能够抑制革兰氏阳性菌(如
葡萄球菌、
链球菌)及部分非目标革兰氏阴性菌的生长,仅允许大肠埃希氏菌等肠杆菌科细菌存活并繁殖,从而提高目标菌的检出率。
4、指示剂(常用溴甲酚紫)
溴甲酚紫的变色范围为 pH 5.2(黄色)~6.8(紫色)。当细菌发酵山梨醇产酸时,培养基 pH 下降,指示剂由紫色变为黄色;若细菌不发酵山梨醇,培养基 pH 无明显变化,指示剂保持紫色。
5、氯化钠
维持培养基的渗透压平衡,保证细菌正常生理活动。
二、实验现象及结果判断
该培养基的实验现象需结合细菌生长情况和指示剂颜色变化综合判断,具体如下:
1、接种与培养条件
将待检样品(如食品、粪便、水样)接种至蛋白胨山梨醇胆盐肉汤中,置于 36±1℃ 恒温培养箱中培养 18~24h。
2、阳性现象(非致病性大肠埃希氏菌生长)
培养基变浑浊,表示细菌大量增殖;
指示剂由初始紫色变为黄色,部分菌株发酵山梨醇时还会产生气体,若使用含小倒管的培养基,倒管内会出现气泡。
结果解读:该菌株可发酵山梨醇,大概率为非致病性大肠埃希氏菌。
3、疑似目标菌现象(致病性大肠埃希氏菌 O157:H7 生长)
培养基变浑浊,细菌正常增殖;
指示剂保持紫色不变,无酸产生,倒管内无气泡(或仅有极少量气泡,非山梨醇发酵所致)。
结果解读:该菌株不发酵山梨醇,为疑似致病性
大肠埃希氏菌 O157:H7,需进一步通过血清学鉴定或分子生物学方法确认。
4、阴性现象
培养基澄清无浑浊,指示剂保持紫色;
结果解读:样品中无大肠埃希氏菌生长,或生长的细菌被胆盐抑制。
三、注意事项
胆盐的浓度对选择性影响较大,浓度过高会抑制目标菌生长,浓度过低则无法有效抑制杂菌,需严格按照配方配制。
培养时间需控制在 18~24h,超过 24h 可能导致非目标菌适应胆盐环境并缓慢生长,干扰结果判断。
该培养基仅为初步筛选手段,疑似阳性菌株必须结合后续鉴定实验才能确诊。
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