双料肠球菌肉汤培养基的使用方法与培养现象及结果判读！
小杨 / 2025-07-07 09:12:02
双料肠球菌肉汤培养基管是用于水中或某些食品中
粪肠球菌和
屎肠球菌（统称粪链球菌群）推定性检测的选择性增菌培养基。其使用方法和观察现象如下：
一、使用方法 (Standard Method)
1、样品准备：
水样：根据预计污染程度，选择合适体积的水样（如100mL、10mL、1mL）或适当稀释度。
食品样：需按标准方法（如ISO或国标）进行均质、稀释。
2、接种：
关键点：“双料”意味着培养基的营养成分浓度是单料的两倍，因此用于接种较大体积的样品。
用无菌吸管吸取10mL水样（或食品样品的10mL稀释液）直接加入到一支双料肠球菌肉汤培养基管中。
注意：如果接种量小于10mL（如1mL），则应使用单料肠球菌肉汤培养基管。双料管专门为接种10mL样品设计。
3、培养：
将接种好的培养基管放入恒温培养箱。
培养温度：36 ± 1°C
培养时间：48 ± 2小时
4、观察：
在培养结束后（通常24小时和48小时各观察一次），取出培养基管。
肉眼观察培养基的浑浊度变化和产气情况（观察杜氏小管）。
二、现象与结果判读
1、阳性结果 (推定阳性 - Presumptive Positive)：
浑浊度：培养基出现明显的浑浊（与未接种的空白管对比）。
产气：杜氏小管顶端有气泡聚集（无论大小，即使是很小的气泡也算）。气泡的产生是由于某些肠球菌能发酵培养基中的糖类产气。
判定：只要在培养期内（通常是48小时）观察到浑浊并伴有任何产气现象，即可判定为粪链球菌群推定阳性。这是初步指示样品中可能存在目标菌。
2、阴性结果 (推定阴性 - Presumptive Negative)：
浑浊度：培养基保持澄清或仅有极其轻微、不显著的浑浊（与空白管无明显区别）。
产气：杜氏小管内完全没有气泡。
判定：培养48小时后未观察到浑浊和产气，判定为粪链球菌群推定阴性。
三、重要注意事项
1、推定性试验：双料肠球菌肉汤的阳性结果仅表明样品中可能存在粪链球菌群。它不能作为最终确认。阳性管必须进行后续的确证试验（如转移到胆汁七叶苷琼脂/BEA斜面或KF链球菌琼脂上培养，并进行革兰氏染色、过氧化氢酶试验、吡咯烷酮芳基酰胺酶试验等生化鉴定）才能最终报告检出粪肠球菌或屎肠球菌。
2、选择性与差异性：
叠氮化钠：是主要的选择性抑制剂，能抑制大多数革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌的生长，而肠球菌对其有相对耐受性。
TTC (氯化三苯基四氮唑)：常作为指示剂加入。肠球菌生长时还原TTC，使菌落或培养基呈现红色或粉红色（尤其是在确证培养基如BEA上更明显）。但在肉汤管中，浑浊本身是主要指标，颜色变化可能不如在固体培养基上显著。
3、无菌操作：整个接种过程必须在无菌条件下进行，避免杂菌污染导致假阳性。
4、温度控制：严格控制培养温度（36°C）对结果准确性至关重要。
5、观察时机：建议在24小时和48小时分别观察记录一次。有些阳性可能在24小时就显现，有些则要到48小时。最终判读以48小时结果为准。
6、标准依据：具体操作步骤（如接种量、培养时间、确证方法）应严格遵循你所执行的检测标准（如《GB/T 8538-2022 饮用天然矿泉水检验方法》、《GB 4789.6 食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》中相关的肠球菌检测部分，或ISO 7899-2等国际标准）。
四、总结：
用法：接种 10mL 样品液到双料肠球菌肉汤管中，36°C 培养48小时。
阳性现象：浑浊 + 杜氏小管内有气泡（推定存在粪链球菌群）。
阴性现象：澄清/轻微浑浊（无显著变化） + 杜氏小管内无气泡（推定无粪链球菌群）。
关键下一步：所有阳性管必须进行确证试验才能报告最终结果。
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