实验室血清的质检要点及使用难点总结与解决方案！_研究动态

小杨 / 2025-05-21 10:04:29

百欧博伟生物：以下是关于实验室血清的质检要点、在不同细胞系中的验证方法及使用难点的总结，结合了多个来源的信息：

一、血清的质检要点

1、理化性质检测

颜色与澄清度：优质血清通常呈淡黄色或微红色，澄清度较高。胎牛血清因蛋白和脂类含量低，质地较稀薄，而新生牛血清更粘稠。

沉淀物分析：血清中常见纤维蛋白、磷酸钙等沉淀物，需通过离心（400g，5分钟）去除，避免过滤导致滤膜堵塞。

2、微生物与安全性检测

无菌检测：需进行支原体、病毒及细菌污染检测，确保无微生物污染。

内毒素与补体活性：内毒素水平需低于阈值（如<10 EU/mL），补体活性可通过热灭活（56℃, 30分钟）评估，但非必要情况下不建议灭活。

3、功能性验证

促生长能力测试：通过细胞增殖实验评估血清对特定细胞系的促生长效果，例如3T3细胞的增殖实验。

贴附与迁移能力：如划痕实验（AGS细胞）和迁移实验验证血清对细胞贴壁和运动的影响。

二、血清在不同细胞系中的验证

1、肿瘤细胞系

AGS细胞（胃癌细胞）：通过划痕实验验证血清对细胞迁移的抑制作用，需使用含10% FBS的Ham's F-12培养基。

PC-3细胞（前列腺癌细胞）：实验显示雄激素受体抑制迁移，血清浓度需稳定以维持实验一致性。

2、神经细胞系

SH-SY5Y细胞（神经母细胞瘤）：使用含15% FBS的DMEM/F12培养基，验证神经突触延伸功能。

3、免疫细胞系

THP-1细胞（单核细胞）：趋化实验中，含10% FBS的RPMI 1640培养基支持细胞定向迁移。

4、干细胞与敏感细胞

干细胞（如iPSC）需使用胎牛血清（FBS），因其抗体含量低且生长因子丰富，需通过标志物验证未分化状态。

三、血清使用的难点与解决方案

1、保存与解冻

保存条件：长期保存需-80℃，常用分装至-20℃；避免反复冻融导致沉淀增加。

解冻方法：需从-20℃转移至4℃缓慢解冻，避免直接置于37℃或剧烈摇晃，以减少絮状沉淀。

2、沉淀物处理

沉淀物通常为纤维蛋白或磷酸钙，不影响细胞生长，但需离心去除（400g, 5分钟），不可过滤。

3、血清替换与驯化

更换血清品牌时需逐步过渡，初始比例新血清:原血清=1:3，逐步提高至100%，并监测细胞状态。

4、热灭活的争议

热灭活可能降低血清活性，仅在特定实验（如免疫学）需要，常规培养不建议使用。

5、批次差异与质量控制

不同批次血清存在生长因子含量差异，需通过预实验筛选适配批次，必要时进行功能性验证。

四、总结

血清的质检需综合理化、微生物及功能指标，验证时需针对不同细胞系设计实验（如增殖、迁移）。使用难点主要集中在保存、沉淀处理和批次差异，需严格操作流程并逐步优化条件。

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