一、产品信息
平台编号：Bio-109760
规格：500ml
相关信息：/
细胞名称：原代神经元细胞培养体系
用途：细胞专用培养基
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、产品介绍
原代神经元细胞培养体系是一个为体外生长的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳动物的神经元细胞设计的理想的无血清完全培养基方案。本体系是一个基于碳酸氢盐的缓冲体系，可以在孵育的5%的CO2的气体环境下维持一个围绕pH7.2的酸碱缓冲体系。本体系是一个无菌的液体混合系统，其中包含必须和非必须氨基酸、维生素、激素、微量元素、B27等生长因子和一些其他的有机和无机化合物。本培养体系是基于固定配方配制的液态培养体系，可以为体外培养的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳动物的神经元细胞提供一个确定适宜的平衡营养环境，并且可以选择性的维持神经元细胞的生存。
三、体系组成
名称 体积 浓度 保存条件
原代神经元细胞基础培养基 500ml 1× 4℃、避光
原代神经元细胞培养添加剂 10ml 50× -20℃、避光
双抗（青霉素/链霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光
四、产品的运输和保存
放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输（体系中的各组分请按上述列表中的条件进行储存）
五、产品使用
1)本产品仅能用于科研
2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3)本产品未通过用于活体诊断的审核
六、培养方法
1、孕18天（E18d）SD大鼠。
2、培养板处理，每孔加0.01％多聚赖氨酸（PDL）盖没底部，过夜移去。
3、无菌水洗2次后，加DMEM＋10％BS培养液平衡。
4、SD大鼠戊巴比妥麻醉，先用碘酒消毒大鼠腹部，再用75％乙醇消毒，切开子宫取胎鼠，移入超净台中，去除胎盘和脐带，将胎鼠放入另一无菌平皿中。
5、直接取脑。直头镊子将头部膜去除，如果不易去除，用尖头镊子刺一下；用弯头镊子将脑取出。
6、剥脑（取纹状体组织，去除脑膜血管），解剖显微镜下除去小脑，将大脑左右半球沿中缝分开，镊子去除中脑部分，然后将脑膜去除（去除脑膜主要是除去上皮细胞）。将去除脑膜后的半脑尽量分开，确认嗅球的位置，轻轻将皮层展开。嗅球后面颜色深的部分即为纹状体，海马为半透明月牙状。将组织放入4度的D－Hanks溶液中。
7、移去D－Hanks溶液，用虹膜剪将组织剪成1×1×1mm3的小块。
8、取0.125％胰酶（溶解在D－Hanks）5mL，加入20μL 25mg/mL Dnase，放入10mL离心管中，将剪碎的组织放入胰酶，37度消化15min，消化过程中轻摇2～3次。
9、将消化后的组织移入另一离心管，用DMEM＋10％BS 终止反应。DMEM＋10％BS加至6mL。
10、用火焰刨光的玻璃滴管轻轻吹打数次，静止2-3min，吸出上层细胞悬液至50mL离心管中，剩下的另加入DMEM＋10％BS至6mL，用滴管轻吹数次，移入至50mL离心管中。
11、细胞计数。用DMEM＋10％BS培养液调整细胞密度，接种在35mm皿中。（计数时，稀释5倍计数）。细胞数目7～8×105个 /mL，6孔板加入1mL。
12、5小时后换成全部Neurobasal＋B27 2％，以后每隔2～3天进行1/3-1/2量换液。
七、注意事项
1、仅限科研用。
2、培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质，请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部；这部分有害物质的浓度和危害性都较低，如有接触，立即用自来水冲洗即可。
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