中国微生物菌种查询网菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。下面给大家介绍一种简单有效的保存方法液体石蜡覆盖保藏法。
液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。它原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡,达到菌体与空气隔绝,使菌处于生长和代谢停止状态,同时石蜡油还防止水分蒸发,在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求在-4-4℃下,液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。具体的操作方法:
1、将液体石蜡分装于三角烧瓶内,塞上棉塞,并用牛皮纸包扎,1.05kg/cm,121℃灭菌30分钟,然后放在40℃温箱中,使水汽蒸发掉,备用。
2、将需要保藏的ATCC菌种,在最适宜的斜面培养基中培养,使得到健壮的菌体或孢子。
3、用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡,注入已长好菌的斜面上,其用量以高出斜面顶端1cm为准,使菌种与空气隔绝。
4、将试管直立,置低温或室温下保存(有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长)。
这方法不但实用且效果好,又简单,还不需特殊设备,更不需经常移种。像ATCC菌种 霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死,酵母菌可保藏1-2年,一般无芽孢细菌也可保藏1年左右,甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌,在37℃温箱内,亦可保藏3个月之久。