材料、设备及试剂
一、材料
外源DNA段:自行制备的带限制性末端的DNA溶液,浓度已知;载体DNA:T-vector(Ampr,lacZ),自行提取纯化,浓度已知;宿主菌:E.coliDH5α,或JM系列等具有α-互补能力的菌株。
二、设备
恒温摇床，台式高速离心机，恒温水浴锅，琼脂糖凝胶电泳装置，电热恒温培养箱，电泳仪无菌，工作台，微量移液枪，eppendorf管。
三、试剂
1、连接反应缓冲液(10×)：0.5mol/LTris?Cl(pH7.6)，100mol/LMgCl2，100mol/L二硫苏糖醇(DTT)(过滤灭菌），500μg/ml牛血清清蛋白(组分V.Sigma产品）（可用可不用），10mol/LATP（过滤灭菌）。
2、T4DNA连接酶(T4DNAligase)；购买成品。
3、X-gal储液(20mg/ml):用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的储液,包以铝箔或黑纸以防止受光照被破坏,储存于-20℃。
4、IPTG储液(200mg/ml):在800μl蒸馏水中溶解200mgIPTG后,用蒸馏水定容至1ml,用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于eppendorf管并储于-20℃。
5、含X-gal和IPTG的筛选培养基：在事先制备好的含50μg/mlAmp的LB平板表面加40mlX-gal储液和4μlIPTG储液,用无菌玻棒将溶液涂匀,置于37℃下放置3-4小时,使培养基表面的液体完全被吸收。