部分国家检测标准中明确规定使用阳性和阴性菌株作为对照菌株,除此之外实验室对培养基进行质量控制与验收都会用到商品化的标准菌株。目前国产商品化的标准菌株主要以干粉形式销售,将标准菌株进行有效的活化和保藏对于实验室来说是非常重要的,下面分别介绍菌种活化保藏方法及相应培养基。
一、菌种活化(ATCC菌株请按说明书附录“推荐培养基”使用)
1、菌种活化方法:
用无菌吸管吸取0.3-0.4ml适宜液体培养基,滴入菌种管内,轻轻震荡,使冻干菌体溶解成悬浮液体。取0.2ml上述菌悬液转钟于特定的琼脂培养基斜面或平板上,剩余的菌液注入3-4ml特定的液体培养基,再按照菌种特性,置于适宜条件下培养。
2、菌种活化常用液体培养基
(1)普通细菌:
营养肉汤NB胰蛋白胨大豆肉汤TSB脑心浸液培养基BHI胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤TSB-YE
(2)真菌:真菌培养基
(3)乳酸菌:MRS肉汤
(4)嗜盐性弧菌:含3%NaCl的TSB
3、菌种活化常用固体培养基
(1)普通细菌:
营养琼脂NA胰蛋白胨大豆琼脂TSA脑心浸液琼脂BHIA胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂TSA-YE
(2)真菌:马铃薯葡萄糖琼脂培养基
(3)乳酸菌:MRS琼脂MRSA
(4)嗜盐性弧菌:含3%NaCl的TSA
二、菌种保藏
目前主要采用超低温保藏法作为菌株的长期保藏,斜面培养和半固体培养作为实验室传代保藏方法。
1、-80℃低温保藏法
将微生物菌种保藏在-80℃冰箱的一种保藏方法。原理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢,以达到长期有效地保藏微生物。
操作方法:
1、将培养好的菌种制成高浓度的菌悬液(108~1010CFU/mL)。
2、取灭菌甘油与菌悬液充分混匀,使其甘油终浓度约为20%。
3、混匀后分装入冷冻试管或安瓿中,于-60℃~-80℃超低温冰箱中保藏。
2、传代培养保藏法——包括斜面培养和半固体培养等。
操作方法:
即将菌种穿刺到斜面或半固体中,培养好后放在低温干燥处保存(2~5℃冰箱),定期移植,一般1~2个月移植一次(视菌种特征而定)。
使用培养基:
细菌:营养琼脂;
真菌:PDA;
乳酸菌:MRS培养基;
厌氧菌:庖肉培养基;
嗜盐性弧菌:含3%NaCl的TSA或营养琼脂
保藏时间依微生物的种类而定:霉菌、放线菌及芽孢菌保存2~4个月传代一次,酵母菌间隔两个月,普通细菌一个月,假单胞菌两周传代一次。