实验室培养基添加成分的制备过程中如何保证无菌操作？
小杨 / 2026-03-13 09:51:31
一、环境与物品准备（第一步就决定成败）
1、超净台/无菌室
提前紫外照射 30 min
台面用 75% 酒精 擦拭干净
操作时不开风扇、不说话、不频繁伸手进出
2、所有耗材必须无菌
离心管、枪头、滤器、瓶子：高压灭菌/无菌包装
不使用包装破损、过期、敞口过的耗材
3、个人无菌习惯
戴手套，并用 75% 酒精喷洒
袖口扎紧，不戴首饰
瓶口、枪头不碰任何非无菌面
二、培养基添加成分配制时的无菌核心
1、热敏成分（血清、双抗、生长因子、谷氨酰胺）
全程不开盖太久，尽量在超净台内操作
开盖后瓶口酒精灯过火（快速过一下，不要烧久）
吸取液体用无菌枪头，一支枪头只吸一种液体
2、母液配制（抗生素、生长因子母液最关键）
用无菌水/无菌 PBS 溶解
溶解、混匀全程在超净台
配好后立即 0.22 μm 滤膜过滤除菌
过滤后立刻分装，-20℃保存，避免反复冻融
3、过滤除菌标准操作
选择 0.22 μm 无菌滤器
先小量试滤，确认不漏液
过滤时不要加压过猛，防止漏滤、破膜
过滤完的液体不要再敞口暴露
4、向基础培养基里加添加剂
基础培养基必须冷却到 50℃以下（不烫手）再加
所有添加步骤只在超净台内完成
加完轻轻混匀，不要剧烈摇晃产生泡沫
配好的完全培养基尽快 4℃保存，尽快用完
三、最容易污染的 5 个“坑”& 解决办法
瓶口碰到台面、手套→ 瓶口悬空，不碰任何东西，开盖即过火。
一支枪头混用多种液体→ 一液一枪头，宁可浪费，不省枪头。
母液配完不立刻过滤→ 溶解完马上过滤，不要放置。
在普通实验台配添加剂→ 所有热敏成分、母液、加样必须在超净台。
培养基反复开盖、反复取用→ 尽量分装小瓶，减少污染概率。
四、最简单的自检标准
所有溶液接触的东西：只有无菌耗材 + 无菌液面
手、台面、笔、手机 绝不进入无菌区
凡是加热会失活的成分，一律过滤，绝不高压
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