微生物样品采集与保存标准操作规程及质量控制与注意事项！
小杨 / 2026-02-25 10:30:35
一、人员与环境准备
1、人员要求
操作人员须接受专项培训，掌握无菌操作及生物安全知识。
操作前应穿戴洁净无菌服、口罩、帽子和手套。必要时佩戴防护镜。
使用75%酒精或免洗消毒液彻底进行手部消毒。
2、环境与工具准备
环境：选择洁净、避风、无尘的区域进行操作。理想条件下应在超净工作台或生物安全柜内进行。提前对操作区域进行清洁与消毒。
工具与容器：准备无菌且完好无损的采样工具（如无菌采样拭子、剪刀、镊子、勺、移液管、注射器等）和容器（如无菌袋、瓶、离心管、保种管等）。所有工具容器在使用前需检查包装完整性及有效期。
辅助物品：准备酒精灯、75%酒精棉球、冰袋或干冰、保温箱（若需低温）、样本标签、防水记号笔、采样记录单、生物危害废弃物袋等。
二、样品采集操作规程
1、通用原则
无菌操作：全程遵循无菌原则，避免人为污染。接触样品前，所有工具和容器开口处需用酒精灯火焰短暂灼烧灭菌（若适用且安全）。
代表性：确保采集的样品能真实反映目标微生物的总体状况。
足量：采集足够量的样品以满足全部检测项目的需求。
标识清晰：每个样品应立即贴上唯一性标识，并记录关键信息。
防护与安全：根据样品可能含有的微生物风险等级，采取相应的生物安全防护措施。处理高致病性病原微生物时，必须在相应等级的生物安全柜内操作。
2、不同类型样品采集方法
（1）液体样品（如水、饮料、液体培养物等）
混匀后，使用无菌移液管、注射器或直接倾倒方式取样。
避免吸头或工具接触非样品表面。容器口部在取样前后应迅速通过火焰。
注入适量体积于无菌密封容器中，避免过满，留出空间。
（2）固体/半固体样品（如食品、土壤、粪便、组织等）
使用无菌器具（刀、剪、勺、钻取器等）从样品的内部或具有代表性的部位采集。
对于非均质样品，应从多个部位取样并混合。
一般采集10-25克（或立方厘米）置于无菌均质袋或广口瓶中。
（3）表面样品（如设备、工器具、工作台、手部等）
拭子法：用无菌棉拭子或海绵拭子蘸取适量无菌稀释液（如磷酸盐缓冲液、生理盐水或中和缓冲液），在待测表面以一定力度、按规则路径（如“之”字形或水平/垂直全覆盖）反复涂抹。将拭子头折断或剪入含保存液的试管中，旋紧盖子。
接触平板法：直接打开无菌接触平板，使培养基表面与待测表面均匀接触。
冲洗/洗脱法：将无菌稀释液倒入或喷洒于待测表面，收集洗脱液。
（4）空气样品
使用专业的空气微生物采样器（如撞击式、离心式、过滤式或自然沉降法）。
根据采样器类型设定合适的流量和采样时间。记录采样位置、时间、流量及环境参数。
使用后的采样平板或采样条应立即盖好并标识。
三、样品标识、保存与运输
1、样品标识
每个样品容器上必须牢固粘贴标签，使用防水记号笔清晰注明：样品唯一编号、样品名称、采样日期与时间、采样地点/部位、采样人、预定检测项目等信息。
采样记录单应同步详细填写上述信息，并补充采样环境条件（温湿度等）、样品状态等描述。
2、样品保存
及时处理：采集后应尽快处理或送检，以减少微生物群落变化。
温度控制：
多数细菌样品应在 2-8℃ 冷藏保存和运输，通常在 24-48小时 内检测。
病毒样品或需要长期保存的菌种，通常需在 -20℃或-80℃ 冷冻保存，避免反复冻融。
对温度敏感的微生物（如某些嗜冷菌、嗜热菌），需按特定要求保存。
使用冰袋、干冰或专用保温箱维持冷链，确保样品在运输途中处于要求的温度范围。
保存液：某些样品（如拭子样本）可能需要特定的转运培养基或保存液以维持微生物活性。
3、样品运输
包装：采用三级包装系统，确保无泄漏。
主容器：存储样品的无菌、防漏的原始容器，包裹足够的吸水材料。
辅助容器：坚固、防漏的第二层容器，用于固定和保护主容器。
外包装：坚固的外箱，用于保护辅助容器，并贴有清晰的标识（包括样品信息、运输条件、生物危害标识（如适用）、收发件人信息等）。
运输要求：选择快速可靠的运输方式。冷藏/冷冻样品必须使用足够的冷媒，并监控运输过程中的温度。运输含潜在病原微生物的样品，须遵守国家关于感染性物质运输的相关法规。
四、质量控制与注意事项
避免污染：操作迅速，减少样品在空气中的暴露时间。不同样品间必须更换无菌工具，或对工具进行彻底消毒。
过程记录：详细、准确地记录采样全过程，任何异常情况（如包装破损、温度失控）均需记录。
样品接收：实验室接收样品时，需核对标识、检查包装完整性、测量温度并记录。不符合接收标准的样品应拒收并通知采样方。
废弃物处理：所有使用过的、可能被污染的采样材料，均应作为生物危害废弃物进行处理，通常通过高压蒸汽灭菌或使用有效的消毒剂浸泡。
五、安全须知
操作人员应了解所采样品的潜在生物危害。
处理未知或高致病性样品时，必须遵循相应生物安全级别（BSL）的防护要求。
发生样品泄漏、破损或人员暴露等意外时，应立即按应急预案处理，并报告相关负责人。
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