沉降法监测无菌室消毒效果的操作与标准流程及结果判定！
小杨 / 2026-02-24 11:26:08
百欧博伟生物：沉降法是空气微生物监测常用简便方法，核心原理：自然沉降原理，空气中微生物粒子因重力落到营养琼脂平板，培养后计数菌落数，判断无菌室空气洁净度、消毒是否达标。
一、适用范围
无菌室、洁净室、超净台、生物安全柜空气消毒效果监测
静态/动态监测（静态：无人、设备停转；动态：有人操作）
配合紫外线、臭氧、过氧乙酸、洁净空调等消毒后效果验证
二、核心材料与器材
培养基
普通营养琼脂平板（φ90mm）：细菌总数
沙氏葡萄糖琼脂：真菌/酵母（必要时加做）
器材：无菌平皿、恒温培养箱、酒精灯/超净台、记号笔、采样记录单
三、布点原则（关键）
1、房间面积布点（GB/T 16294 参考）
≤30㎡：对角 3 点（中心 1 点、两对角各 1 点）
＞30㎡：5 点法（中心 1 点、四角各 1 点）
无菌室常用：四角 + 中央共 5 点，距墙≥1m
2、高度与间距
高度：距地面 80～150cm（操作呼吸带高度）
间距：各点≥1m，远离出风口、回风口、墙角死角
3、对照设置（必须）
空白对照：同批次培养基，不打开平皿，同条件培养，用于排除培养基污染
四、操作步骤（标准流程）
消毒完成后（紫外线 30min /臭氧/化学熏蒸结束，通风静置 10～20min）
按布点放置平板，水平放置，避免震动、气流直吹
打开平皿盖，扣放于平板旁，暴露30min（国标常用沉降时间）
暴露结束，立即盖好平皿，倒置标记：日期、地点、时间、组别
培养条件：
细菌：36℃±1℃，48h 计数
真菌：25℃±1℃，5～7d 计数
记录每皿菌落数（CFU / 皿）
五、结果计算与判定（常用行业标准）
1、空气细菌浓度估算（奥梅梁斯基公式）
细菌数(CFU/m 3 )= A×t50000×N
N：平均菌落数（CFU / 皿）
A：平皿面积（cm²，φ90mm≈63.6cm²）
t：暴露时间（min）
日常简化：直接用平均 CFU /皿对比限值即可。
2、常见洁净级别限值（医药/检验/生物实验室通用）
洁净区域 静态（无人） 动态（有人）
百级 /Ⅰ 级 ≤1 CFU /皿 ≤2 CFU /皿
万级 /Ⅱ 级 ≤3 CFU /皿 ≤5 CFU /皿
十万级/普通无菌室 ≤10 CFU / 皿 ≤15 CFU /皿
若为GMP 无菌药品区，需按药典/GB 50073 执行；临床微生物实验室一般参照≤10 CFU /皿合格。
六、合格判定标准
空白对照无菌落生长
连续 3 次监测合格，方可判定消毒效果合格
七、注意事项（影响结果关键）
暴露时间严格30min，过长/过短均失真
操作时轻拿轻放，避免人员走动、说话、咳嗽，减少人为污染
培养基需无菌验证合格，在有效期内使用
避免空调/风机直吹平板，采样时关闭不必要扰动气流
菌落密集、蔓延生长时，记为多不可计，重新采样
沉降法为半定量，如需精准，配合撞击法（空气采样器）
八、不合格原因与整改
菌落数偏高：
消毒时间不足、紫外线灯管老化/强度不够
通风、洁净系统失效
表面清洁不到位、人员操作污染
整改：
延长消毒时间、更换紫外灯、强化物表擦拭
重新布点复测，连续 2 次合格方可使用
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