菌落总数测定核心要求之样品稀释、培养基倾注、质量控制
小杨 / 2026-02-07 18:40:28
一、样品与稀释要求
无菌操作全程：所有器皿、稀释液、操作均需无菌，避免环境/手/空气污染。
稀释液：优先用 0.85% 无菌生理盐水 或 磷酸盐缓冲液（PBS）。
稀释梯度：
一般食品：10⁻¹ → 10⁻² → 10⁻³ 逐级稀释
污染高：从更高稀释度开始（如 10⁻⁴）
均质要求：
固体/半固体：均质器 8000～10000 r/min，1～2 min
避免过度均质导致细胞损伤
稀释后尽快接种：≤15 min 内完成倾注，防止菌繁殖/死亡。
二、培养基与倾注要求
培养基：平板计数琼脂（PCA）
培养基温度：倾注时 46±1℃（过高烫死菌，过低凝固不均）。
每皿倾注量：15～20 mL。
每稀释度至少 2 块平行平板，结果取平均值。
必须做空白对照（只加培养基不加样液），用于监控污染。
三、培养条件（关键）
温度：36±1℃
时间：48±2 h
有氧静置培养（不需 CO₂、不需厌氧）
四、菌落计数与选择要求
选择菌落数在 30～300 CFU 之间的平板计数（最准确区间）。
若：
只有低稀释度＜30：用＜30 的平板估算（报告“估计值”）
所有平板＞300：记录多不可计，选菌落疏密适中的平板估算
不同稀释度均在 30～300：取平均值
链状、片状生长：不计入，或按单个菌落估算（注明）。
菌落过小/弥散：结合经验判断，必要时重新测定。
五、结果计算与报告要求
1、计算公式：
2、结果保留两位有效数字，或按标准要求表示（如 2.1×10⁴）。
3、若无菌落生长：报告 ＜1× 稀释倍数（如＜10 CFU/g），不得写 “0”。
六、质量控制与误差要求
平行平板误差：同稀释度两块平板菌落数差值不得超过平均值的 10%。
培养基质控：每批做阳性对照（标准菌株）+ 阴性对照。
器皿灭菌：121℃ 15 min，干热 160℃ 2 h。
环境要求：在洁净台/无菌室操作，定期做沉降菌监控。
七、常见禁止/易错点（必记）
禁止用已凝固、有气泡、干裂、污染的平板。
禁止超温培养、超时培养、温度波动大。
禁止将霉菌、酵母、扩散性菌落计入菌落总数。
禁止不同稀释度随意取舍，必须按 30～300 规则。
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