食品微生物检测的质控样品制备标准操作规程及注意事项！
小杨 / 2026-01-22 10:11:06
百欧博伟生物：食品微生物检测质控样品制备标准操作规程（SOP），目的：规范食品微生物检测用质控样品的制备流程，确保质控样品的均匀性、稳定性和溯源性，为日常检测工作提供可靠的质量控制依据。适用范围：适用于食品微生物检测实验室中阳性质控样品（目标菌）、阴性质控样品（无目标菌）及加标质控样品的制备。职责：实验室质控人员负责质控样品的制备、标定、储存及稳定性监测；检测人员负责使用质控样品进行日常质量控制。
一、试剂与材料准备
1、标准菌株
来源：需选用具有溯源性的标准菌株，如中国微生物菌种保藏管理委员会（CGMCC）、美国典型培养物保藏中心（ATCC）等权威机构提供的菌株。
复苏：按照菌株说明书进行复苏培养，确保菌株处于对数生长期，活性良好。
2、培养基与试剂
无菌生理盐水（0.85% NaCl）、磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2~7.4）：用于菌株的稀释和悬浮，需 121℃高压蒸汽灭菌 20 min。
3、耗材与仪器
无菌耗材：移液器吸头、离心管、锥形瓶、均质袋、涂布棒、接种环等，需经灭菌处理并验证无菌。
仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、生物安全柜、涡旋振荡器、菌落计数器、冰箱/超低温冰箱。
二、质控样品分类及制备流程
（一）阳性质控样品（纯菌悬液）
用于验证检测方法的灵敏度和特异性，适用于培养基性能验证、检测人员操作熟练度考核。
1、菌株活化
从冻存的标准菌株中取 1 环，接种至相应的液体培养基中，于适宜温度（如细菌 36℃±1℃）振荡培养 18~24 h，至对数生长期。
取活化后的菌液，划线接种至固体培养基平板，培养后挑取单菌落再次接种至液体培养基，确保菌株纯度。
2、菌悬液制备
取培养好的菌液，5000 r/min 离心 10 min，弃上清液。
加入无菌生理盐水或 PBS 缓冲液，涡旋振荡重悬菌体，再次离心洗涤，重复 2 次，去除培养基残留。
用无菌生理盐水或 PBS 调整菌悬液浓度，通过麦氏比浊法或平板计数法标定浓度，通常制备为 106∼108CFU/mL 的母液。
3、分装与储存
在无菌条件下将菌悬液分装至无菌冻存管，每管 0.5~1 mL。
短期储存（≤7 d）：4℃冷藏；长期储存（数月至数年）：-80℃超低温冰箱，或加入 10%~20% 甘油作为保护剂后冻存。
（二）阴性质控样品
用于验证检测过程中是否存在污染，确保实验空白无目标菌生长。
基质选择：选用不含目标微生物的食品基质（如灭菌后的奶粉、纯净水、肉制品匀浆等），或直接使用无菌生理盐水/PBS。
灭菌处理
液体基质：121℃高压蒸汽灭菌 20 min，或采用过滤灭菌（适用于不耐热基质）。
固体基质：切碎后装入均质袋，采用 γ 射线灭菌，或高压蒸汽灭菌（需确认基质耐受力）。
无菌验证：取处理后的基质 10 mL（或 10 g），接种至相应培养基，培养后观察有无菌落生长，确认无菌后方可作为阴性质控样品。
储存：4℃冷藏保存，保质期不超过 7 d，每次使用前需再次验证无菌性。
（三）加标质控样品（基质加标）
用于模拟实际食品样品的检测环境，验证检测方法在复杂基质中的准确性和回收率，是日常检测最常用的质控样品。
阴性基质准备：按照“阴性质控样品”制备方法，准备不含目标菌的食品基质（如牛奶、鸡肉、蔬菜汁等）。
1、加标操作
取制备好的阳性菌悬液母液，用无菌生理盐水进行梯度稀释，制备成低、中、高 3 个浓度梯度的菌悬液。
在无菌条件下，向 100 g（或 100 mL）阴性基质 中加入 1 mL 梯度稀释后的菌悬液，充分振荡或均质 2 min，使菌液与基质均匀混合。
加标浓度设定：低浓度接近方法检出限，中浓度为检出限的 10~20 倍，高浓度为检出限的 100 倍左右。
2、浓度标定（回收率验证）
加标后立即取 10 g（或 10 mL）样品，按照常规检测方法进行菌落计数，平行测定 3 次，计算平均回收率。
回收率要求：70%~110% 为合格，超出范围需重新制备。
3、分装与储存
按检测需求分装为每份 25 g（或 25 mL），密封后标记加标菌种类、浓度、制备日期。
短期使用：4℃冷藏，24 h 内用完；长期使用：-20℃冷冻，保质期不超过 1 个月，解冻后需一次性使用。
三、质量控制要点
1、均匀性验证
对制备好的加标质控样品，随机抽取 5 份进行平行检测，计算菌落数的相对标准偏差（RSD），RSD ≤ 15% 视为均匀性合格。
2、稳定性监测
定期对储存的质控样品进行浓度复测：冷冻样品每月复测 1 次，冷藏样品每天复测 1 次，当浓度下降超过 20% 时，该批次质控样品作废。
3、溯源性记录
建立质控样品制备台账，记录标准菌株来源、活化次数、菌液浓度、基质信息、加标量、标定结果、储存条件及使用情况，确保全程可追溯。
4、污染防控
制备过程需在生物安全柜或超净工作台中进行，严格区分阳性、阴性样品操作区域，避免交叉污染。
所有接触过活菌的耗材，需经高压灭菌后再处理。
四、注意事项
标准菌株的活化次数不宜过多（≤5 代），防止菌株性状发生变异。
麦氏比浊法标定的菌液浓度为估算值，精确浓度需以平板计数法为准。
不同食品基质的理化性质差异较大，加标后需根据基质特性调整检测前处理方法（如 pH 调节、增菌培养时间等）。
冻存的质控样品解冻时需在室温缓慢融化，避免反复冻融导致菌体失活。
五、废弃物处理
制备过程中产生的菌液、培养基、污染耗材等，需经 121℃高压蒸汽灭菌 30 min 后，按照实验室生物安全废弃物处理规定处置。
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