实验室中制备选择性培养基的具体步骤及关键注意事项！
小杨 / 2025-10-20 09:56:55
百欧博伟生物：选择性培养基通过添加特定抑制剂或营养物质，抑制非目标微生物生长，同时促进目标菌繁殖，常用于分离特定细菌（如肠道致病菌、耐药菌等）。以下以SS 琼脂培养基（用于分离
沙门氏菌和
志贺氏菌）和麦康凯琼脂培养基（用于分离革兰氏阴性杆菌，尤其是
大肠杆菌）为例，介绍实验室制备步骤。
一、SS 琼脂培养基（Salmonella-Shigella Agar）
1、用途
2、材料准备
配方（1000mL）：
基础成分：蛋白胨 5g、牛肉膏 5g、乳糖 10g、胆盐 8.5g、柠檬酸钠 8.5g、硫代硫酸钠 8.5g、琼脂 15g、蒸馏水 1000mL。
抑制剂与指示剂：1% 中性红溶液 2.5mL、0.1% 煌绿溶液 0.33mL（两者均需过滤除菌）。
仪器：电子天平、烧杯、pH 计、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、无菌移液管、平皿等。
3、具体步骤
（1）基础培养基制备
称取蛋白胨、牛肉膏、乳糖、胆盐、柠檬酸钠、硫代硫酸钠、琼脂，加入 800mL 蒸馏水，搅拌加热至完全溶解（琼脂需煮沸溶解）。
补加蒸馏水至 1000mL，调节 pH 至 7.0±0.1（灭菌后 pH 会略降，需精确控制）。
（2）分装与灭菌
将基础培养基分装至锥形瓶，121℃高压蒸汽灭菌 15 分钟，取出后置于 50-60℃水浴中保温（避免琼脂凝固）。
（3）添加抑制剂和指示剂
在超净工作台中，用无菌移液管吸取 1% 中性红溶液 2.5mL 和 0.1% 煌绿溶液 0.33mL（两者均需提前用 0.22μm 滤膜过滤除菌），加入保温的基础培养基中，轻轻混匀（避免气泡产生）。
注意：煌绿和胆盐是强抑制剂，过量会抑制目标菌，需严格按比例添加。
（4）倒平板
迅速将混匀的培养基倒入无菌平皿（每皿约 15-20mL），待凝固后倒置，4℃避光保存（煌绿遇光易分解，保存时间不超过 1 周）。
二、麦康凯琼脂培养基（MacConkey Agar）
1、用途
2、材料准备
配方（1000mL）：
基础成分：蛋白胨 20g、乳糖 10g、胆盐 5g、氯化钠 5g、琼脂 17g、蒸馏水 1000mL。
指示剂：1% 中性红溶液 3mL、0.5% 结晶紫溶液 1mL（结晶紫需过滤除菌）。
仪器：同 SS 琼脂。
3、具体步骤
（1）基础培养基制备
称取蛋白胨、乳糖、胆盐、氯化钠、琼脂，加入 800mL 蒸馏水，加热搅拌至完全溶解，补加蒸馏水至 1000mL。
调节 pH 至 7.4±0.1（用 pH 计测量）。
（2）分装与灭菌
分装后 121℃灭菌 15 分钟，取出后 50-60℃水浴保温。
（3）添加指示剂
超净工作台中，加入 1% 中性红溶液 3mL 和 0.5% 结晶紫溶液 1mL（结晶紫需过滤除菌），混匀（结晶紫可抑制革兰氏阳性菌，胆盐辅助抑制）。
（4）倒平板
倒平板后凝固，4℃保存（可存放 2 周，避免干燥）。
三、选择性培养基制备关键注意事项
1、抑制剂的处理
热不稳定的抑制剂（如煌绿、结晶紫）需过滤除菌（0.22μm 滤膜），待基础培养基灭菌后冷却至 50-60℃时无菌添加，避免高温破坏。
热稳定的抑制剂（如胆盐）可直接加入基础培养基一同灭菌。
2、浓度控制
抑制剂浓度需严格按配方：过低无法抑制杂菌，过高会抑制目标菌（如 SS 琼脂中煌绿浓度过高会抑制
沙门氏菌）。
3、无菌操作
倒平板、添加抑制剂时需在超净工作台中进行，避免杂菌污染导致选择性失效。
4、pH 调节
目标菌对 pH 敏感时（如
乳酸菌），需精确调节，避免因 pH 不当影响生长。
5、验证试验
制备后需用标准菌株验证：目标菌应生长良好，杂菌应被抑制（如麦康凯琼脂上大肠杆菌生长，葡萄球菌不生长）。
通过以上步骤，可制备出能有效选择性分离目标菌的培养基。不同选择性培养基的核心差异在于抑制剂种类（针对非目标菌）和营养成分（适配目标菌），需根据具体分离对象调整配方。
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