保藏中心细胞库建议使用背景资料上指定的培养基培养细胞系,部分常用的培养基配制方法罗列如下,培养基过滤除菌后应检测无菌状况,然后补加血清和双抗,双抗的使用浓度一般是终浓度100单位/mL培养基。当然,部分细胞可用其它培养基替代,每个实验室都有自己传统的培养基配制方法,我们提供的配制方法仅供参考。
1.消化液的配制:
①胰酶(1:250) 2.5 克 ②EDTA-Na 0.3克 ③NaCl 8.0克 ④KCl 0.4克 ⑤Glucose 1.0克 ⑥Phenol Red 0.005克 ⑦Water 1000 mL 磁力搅拌2-3小时,调pH 7.8-8.0,过滤除菌。 2.MEM medium (1L) ① MEM 1瓶(代) Non-essential amino acids 10 mL 丙酮酸钠 0.11克 water 800 mL
磁力搅拌2-3小时 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力搅拌1小时 ①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。
3. RPMI 1640 medium (1L) ① RPMI 1640 1瓶(代) L-Glutamine 0.11克 丙酮酸钠 0.11克 water 800 mL 磁力搅拌2-3小时 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力搅拌1小时 ①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。
4. DMEM medium (1L) ① DMEM 1瓶(代) Glucose 3.5克 water 800 mL 磁力搅拌2-3小时 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力搅拌1小时 ①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。
5. Grace`s Medium Grace`s Insect Cell Culture Medium 1瓶(代) Yeast extract 3.3克 Lactal albumen hydrolysate 3.3克 NaHCO3 0.35克 water 1000 mL 在15-30℃磁力搅拌4-5小时 用2N KOH 调pH至6.5-6.6,过滤除菌。
6.DMEM/F12 Medium ① DMEM/F12 1瓶(代) L-Glutamine 0.2克 丙酮酸钠 0.11克 water 800 mL 磁力搅拌2-3小时 ② NaHCO3 2.0克 water 200 mL 磁力搅拌1小时 ①+②, 调pH 7.0-7.2,过滤除菌。
7. 部分常用的微生物检测培养基
7.1 Sabouraud dexrosebroth (Difco 0382-01) SDB Sabouraud powder 3.00g Distilled water 100ml pH 5.6 Dispense 3ml aliquots of broth into each of 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.2 Brain heart infusion broth BHI (Difco 0037-01-6) Broain heart infusion powder 3.70g Distilled water 100ml pH 7.4 Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.3 Thioglycollate medium THIO (Difco 0256-01) Thioglycollate powder 2.98g Distilled water 100ml pH 7.1 Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely.
7.4 Trypticase soy broth TSB (BBL 01-162) Trypticase soy broth powder 3.00 g Distilled water 100ml pH 7.3 Dispense 33 test tubes (12×100mm), and cap each tube loosely. All medium are sterilized in an autoclave for 20 min at 15 lbc pressure (121℃) on slow exhaust. Store at room temperature or 4℃
8,包被用多聚赖氨酸配制 取25mg溶于50ml H2O中,过滤除菌,再取4ml 稀释至50ml H2O中 成工作液,4度保存。