NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞的培养操作规程！
小杨 / 2024-03-09 08:53:09
一、背景
NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞是一种人经典小细胞肺癌细胞系，来源于一位小细胞肺癌患者的胸腔积液。这种细胞系具有上皮细胞样的形态，并且贴壁生长。NCI-H1688细胞系被广泛用于生物医学研究，特别是小细胞肺癌的研究。
首先，NCI-H1688细胞系可用于模拟小细胞肺癌在体内的生物学行为。通过体外培养这些细胞，研究人员可以观察它们的生长特性、细胞周期、细胞凋亡等过程，从而深入了解小细胞肺癌的发病机制。
其次，NCI-H1688细胞系还可用于药物筛选和治疗方法的研究。研究人员可以使用这些细胞来测试新药物对小细胞肺癌细胞的细胞毒性、抗增殖作用或诱导凋亡的能力，从而为临床治疗提供药物选择和剂。
1)复苏NCI-H1688细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)NCI-H1688细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)NCI-H1688细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
MicroRNA-150对人小细胞肺癌细胞系生物学表型的影响背景和目的：通过检测小细胞肺癌患者术后标本中发现microRNA-150表达水平可直接影响总体生存时间和无进展生存时间,是SCLC患者预后的独立因素。本实验旨在研究miR-150高表达在体外对于肺癌细胞系的表型的影响。
材料与方法：采用化学方法合成成熟的miR-150寡核苷酸模拟物,以lipofectamine2000瞬时转染小细胞肺癌细胞系NCI-H446和NCI-H1688。转染后48小时,采用real-time RT-PCR技术测定miR-150在各细胞系中的表达水平。转染后24小时,通过MTS法绘制各细胞系的增殖曲线；采用transwell模型及预铺matrigel的transwell模型分别进行迁移、侵袭实验；采用PI(propidium iodide)染色法,流式细胞技术分析细胞周期分布。转染后24小时,以顺铂处理细胞24小时,之后采用Annexin-FITC/PI双染色,流式细胞技术分析细胞凋亡。构建稳定高表达miR-150的H446、H1688细胞系,按照相同方法检测增殖能力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期分布和细胞凋亡。
研究结果：转染后48小时,NCI-H446和NCI-H1688细胞中miR-150的表达水平均显著上调。NCI-H446、NCI-H1688稳转细胞较对照miR-150表达水平显著上调。在体外迁移实验中,miR-150高表达的NCI-H446细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为104±3、170±4,miR-150高表达的NCI-H1688细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为71±2、120±3,差异有统计学意义：侵袭试验中,miR-150高表达的NCI-H446细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为44±3、84±2,miR-150高表达的NCI-H1688细胞系和对照组穿过膜细胞数分别为35±2、60±3,差异有统计学意义；而miR-150高表达对NCI-H446和NCI-H1688细胞的增殖、细胞周期分布以及顺铂诱导的细胞凋亡均无显著影响。结论：miR-150可能通过抑制肺癌细胞的迁移和侵袭能力而在小细胞肺癌患者中发挥保护性作用。
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