环状芽孢杆菌的培养方法与实验内容及注意事项！
小杨 / 2024-03-06 09:25:40
环状芽孢杆菌微生物个体虽小，却在自然界起着巨大的作用。它能把复杂的天然有机物（动植物遗体）及大量的人工合成物有机物，分解为简单的有机物，最终降解成无机物还到大自然中。
一、菌种简介
规格：冻干粉
拉丁属名：Bacillus Circulans
拉丁名称：Bacillus circulans
来源历史：CGMCC
模式菌株：否
生物安全级别：GR1
培养基编号：2
培养温度：30℃
培养时间：24-48h
需氧类型：需氧
分离基物：**
采集地：**
保存方法：冷冻干燥管保藏
用途：研究
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、培养基
*营养琼脂培养基（NA）
*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）
*LB 培养基（以上三款任选一种作为培养基）
三、保藏条件
斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。
四、培养方法
1、安瓿瓶开封：用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长。
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
五、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3、环状芽孢杆菌3.高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
六、注意事项
1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；
2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；
3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；
5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；
6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和
微生物菌种查询网联系；
7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；
8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；
9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；
10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；
11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。
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