MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞的应用及培养操作！
小杨 / 2024-03-02 09:04:37
一、背景
MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞是一种弱免疫原性的细胞系，由纤维肉瘤在C57BL/6小鼠中诱导产生。这种细胞系已被广泛用于诱导肿瘤反应性T淋巴细胞的过继免疫疗法研究中。同时，MCA-205细胞也被用作刺激剂，以研究细胞因子的表达。此外，该细胞系还是研究肿瘤细胞免疫反应和支持靶向癌症免疫疗法开发的绝佳模型。
1)复苏MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
Kif20a在小鼠纤维肉瘤中的作用研究为明确Kif20a在小鼠纤维肉瘤中的作用,我们首先检测了其在小鼠纤维肉瘤细胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞系中的表达情况,发现Kif20a高表达。通过转染成功构建出Kif20a敲低的小鼠纤维肉瘤细胞系,并以此为研究对象,检测其细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的变化,并用Kif20a敲低的小鼠纤维肉瘤细胞系构建荷瘤鼠,观察其肿瘤大小及肿瘤转移情况,结果显示,Kif20a下调后,小鼠纤维肉瘤细胞的活力降低,细胞周期阻滞在G2/M期,克隆形成能力明显降低,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,肿瘤减小,肿瘤组织Ki67的表达降低,提示在小鼠纤维肉瘤中,Kif20a下调仍能抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。
综上所述,本研究显示KIF20A是软组织肉瘤生物调控网络的核心基因,KIF20A在软组织肉瘤中高表达与软组织肉瘤的预后密切相关。在纤维肉瘤细胞系中,转录组测序发现下调KIF20A,多种与生物学进程及信号通路相关的基因发生变化。进一步研究发现,下调KIF20A后,PI3K-AKT活性受到抑制,其下游NF-κB、细胞周期、凋亡等信号通路也发生改变,从而抑制了肿瘤的增殖、迁移、侵袭及转移,促进了肿瘤的凋亡。本研究明确了KIF20A在小鼠纤维肉瘤细胞系WEHI164、MCA101、MCA207、MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞系中的表达情况,探讨了其在纤维肉瘤中的作用及相关机制,提示KIF20A是治疗纤维肉瘤潜在的分子标志物和治疗靶点,为纤维肉瘤的治疗提供新的思路。
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