蜡状芽孢杆菌的鉴定与检测方法及注意事项!
小杨 / 2023-03-21 09:39:07


蜡状芽孢杆菌(芽孢杆菌属蜡状芽孢杆菌)一般指蜡样芽孢杆菌,又称仙人掌杆菌,是一种革兰氏阳性菌,β溶血性的杆状细菌。广泛分布于土壤、水体、空气、植物、饲料、食品和有机垃圾中。是腐生菌,也是条件致病菌。

一、菌种简介
平台编号:Bio-53182
规格:甘油/培养物
拉丁属名:Bacillus Cereus
菌株名称:蜡状芽孢杆菌
其他编号:CMCC63301
培养基编号:2
培养温度:30
培养时间:18-24 小时
用途:产青霉素酶。
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)
保藏条件:安瓿冻干和培养物菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存,甘油管请置于-80°C保存;请勿长期置于室温。 

二、培养基
*营养琼脂培养基(NA)
*胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)
*LB 培养基(以上三款任选一种即可)

三、模式株
ATCC 14579 = CCM 2010 = BCRC (formerly CCRC) 10603 = CCUG 7414 = CIP 66.24 = DSM 31 = HAMBI 1887 = IAM 12605 = IFO (now NBRC) 15305 = JCM 2152 = LMG 6923 = NCCB 75008 = NCIMB 9373 (formerly NCDO 1771) = NCTC 2599 = NRRL B-3711 = VKM B-504

四、病症
蜡样芽孢杆菌是引起食物中毒的常见细菌,在生长条件不好的情况下会产生一种被称为“芽孢”的“外壳”,把自己保护起来,避免死亡。因此,蜡样芽孢杆菌比其它细菌更耐热,常常在加热的条件下也不会死亡。蜡样芽孢杆菌在生长繁殖的过程中会“放毒”,其中两种毒素是引起食物中毒的主要原因。 
食物中毒的临床表现有两种类型:呕吐型和腹泻型。引起呕吐型食物中毒的主要食品是米饭及其制品(80%以上),如:米饭、炒饭、稀饭、米糕、米粉皮、米线等;凉面、豆腐也可以引发。 
腹泻型食物中毒较少见,潜伏期较长,一般在进食后6-15小时发生,临床表现主要是水样腹泻和腹痛,很少伴有呕吐症状。大多数在腹泻数次后症状逐渐减轻,1天左右好转。严重者可引起电解质紊乱、出血性腹泻。引起腹泻型食物中毒的食品较复杂,粮食、肉类、乳类食品均可引发,其中盒饭类混合食品较多见,可能是在分装的过程中污染所致。 
吃了冷藏不当而变质的剩饭是造成呕吐病症的最主要的原因。食用变质食物后1–5小时就会引起恶心、呕吐。这种病症与其他的变质引起的短期病症(如金黄色葡萄球菌所造成的)较难辨别。
以前人们认为有毒物质产生效果的时间与以上两种类型有关,但事实上呕吐综合症是因一种只在引起呕吐的类型中发现的名为cereulide的毒素造成的,并且该产物不是蜡样芽胞杆菌的标准产物之一。Cereulide是一种由非核糖调控缩氨酸综合(NRPS)产生的即使在菌体内也是不常见的dodecadepsipeptide。两个科研小组独立发现这种转录是发生在pCERE01或是pBCE4810质体上。有趣的是,该种质体与有毒的pXO1质体主要构成相同,pXO1是炭疽杆菌中编码毒素的基因,但却处在不同的致病岛上。蜡样芽胞杆菌的牙周分离同样具有不常见的类pXO1质体。

五、鉴定方法
常规分离鉴定技术中检样处理、增菌及分离培养鉴定按GB/T4789.14一2014的方法进行。

六、检测方法
国内外对于蜡样芽抱杆菌的检测方法有常规的检测方法;基于PCR技术、酶反应、免疫学技术的快速检测方法。
常规检测方法是将分离培养后的可疑菌落做生化试验、溶血试验、协同溶血试验、动物试验、典型运动等鉴定,被确定为蜡样芽孢杆菌后进一步进行血清分型。常规检验步骤为:样品→增菌→分离培养(并作菌数测定)、分离纯化→革兰染色镜检/生化及菌落观察/生化反应试验→肠毒素检查。 

七、注意事项
1)冻干粉首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支平板或者斜面,若接种液体培养基,则试管液体不超过 5ml 为宜);
2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;
3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;
4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;
5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;
6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系。
7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到后 2 个月内联系,逾期不予受理;
8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。
10)甘油管使用:使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降。

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