一、知识概述
上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜系眼球外膜呈半球形向前突出的部分。占外膜的1/6，横为椭圆形，约11.5～12mm，垂直径约10.5～11mm，厚约1mm，中央部稍薄约0.8mm；前面曲率半径均值为7.8mm，后面为6.8mm。角膜由致密结缔组织组成，可分为5层，即上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层及内皮细胞层。
二、产品信息
平台编号：Bio-131275
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：HCEC
细胞名称：人角膜上皮细胞HCEC
产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2
细胞数量：1x10^6；1x10^6
保存温度：37℃；-198℃
运输方式：常温保温运输；干冰运输
安全等级：1
用途限制：仅供科研1类
培养体系：DMEM高糖培养基+10%FBS+1%双抗
培养温度：37℃
二氧化碳浓度：5%
简介：人角膜上皮细胞HCEC又名HCECs，取自女性供体，上皮样，贴壁培养。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
三、主要功能
人角膜上皮细胞其主要功能如下：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②人角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③人角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。人角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
四、验收细胞注意事项
1、收到人角膜上皮细胞HCEC细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。
2、收到人角膜上皮细胞HCEC细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。
3、收到人角膜上皮细胞HCEC细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。
4、收到人角膜上皮细胞HCEC时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。
6、24小时后，人角膜上皮细胞HCEC形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。
7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。
特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。
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