一、菌种简介
平台编号：Bio-128952
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：Fcwf-4
细胞名称：猫巨噬细胞Fcwf-4
产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2
细胞数量：1x10^6：1x10^6
保存温度：37℃：-198℃
运输方式：常温保温运输；干冰运输
安全等级：1
用途限制
仅供科研：1类
培养体系:1640培养基 +10%进口胎牛血清+1%双抗
培养温度:37℃
二氧化碳浓度:5%
简介:猫巨噬细胞Fcwf-4取自雌性胎猫。该细胞源于ATCC
注释:Characteristics:Susceptible to infection by feline coronavirus(FCoV).
用途：细胞系
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、培养方式
1、培养基：Fcwf-4 专用培养基【RPMI 1640＋10% FBS＋1% P/S】
2、培养环境：37℃、5%CO2
3、传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，1~2 天传代一次。
（1）用移液器吹打细胞，形成单细胞悬液，然后将其转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心5min；
（2）离心完成后，吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；
（3）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2 培养箱中进行培养。
4、细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。
5、冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
三、质量检测
1、种属鉴定：正确
2、细菌检测：阴性
3、支原体检测：阴性
四、注意事项
1、收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；
2、用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；
3、原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；
4、建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。
5、强烈建议：在第一次细胞传代时，使用本公司配置的细胞培养瓶将细胞按照 1:2 进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。
如果有以上任何问题，请及时联系本公司。
五、验收细胞的操作方法
1、收到猫巨噬细胞Fcwf-4，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。
2、收到猫巨噬细胞Fcwf-4 ，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止 3-5 小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。
3、收到猫巨噬细胞Fcwf-4后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时 血清浓度可以加到 15％去培养。若细胞迏到 80%左右 ，血清浓度还是在 10％。
4、收到猫巨噬细胞Fcwf-4时如无异常情况 ，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下 5-10ML 培养基继续培养：超过 80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000 转/分钟离心 3 分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
5、将培养瓶置于 37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以备不时之需。
6、24 小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加 3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS 或 Hanks’液洗涤后弃去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般 1-3 分钟，不超过 5 分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入 3-5ml 培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。
7、贴壁细胞 ，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2 培养。
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