一、背景
JAR人胎盘绒毛癌细胞源自一位男性胎儿胎盘滋养层肿瘤的上皮细胞样贴壁细胞，生长培养基：RPMI-1640＋10%FBS)＋1%P/S。
二、细胞培养操作：
1、培养基及培养冻存条件准备：
准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2、细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
传代方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
三、应用
用于趋化因子CXCL12和受体CXCR4/CXCR7在植入性胎盘组织中的表达及其作用机制研究：
沉默/过表达CXCL12,CXCR4和CXCR7基因对滋养细胞的调控作用目的探讨沉默/过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后对绒毛外滋养细胞株HTR-8/SVneo和人胎盘绒毛癌细胞株JAR增殖、迁移侵袭、细胞凋亡生物学功能的影响。
方法：
1)利用慢病毒介导RNA干扰/过表达技术,将shRNA或CXCL12、CXCR4和CXCR7基因导入绒毛外滋养细胞株HTR-8/SVneo和人胎盘绒毛癌细胞株JAR中,经过抗性筛选,建立稳定沉默和稳定过表达的单克隆滋养细胞株;
2)应用实时荧光定量RT-PCR及Western Blot法检测沉默/过表达效果;
3)CCK8试验检测细胞増殖;
4)划痕实验检测细胞迁移能力;
5)Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力;
6)流式细胞技术检测细胞凋亡。
结果：
1)成功构建稳定沉默或过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7蛋白的滋养细胞株,分为沉默组:HTR-8/SVneo和JAR/sh CXCL12、HTR-8/SVneo和JAR/sh CXCR4和HTR-8/SVneo和JAR/sh CXCR7;表达组:HTR-8/SVneo和JAR/OE-CXCL12、HTR-8/SVneo和JAR/OE-CXCR4和HTR-8/SVneo和JAR/OE-CXCR7;过表达阴性对照组（过表达空载转染）;沉默阴性对照组（sh空载转染）和空白对照组。
2)过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后HTR-8/SVneo和JAR细胞增值率明显升高（P<0.05）,抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7基因HTR-8/SVneo和JAR细胞增值率明显下降（P<0.05）;
3)过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞迁移距离明显增加（P<0.05）,抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞迁移距离明显减少（P<0.05）;
4)过表达CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞穿过人工基底膜的数量增加（P<0.05）,抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7基因后细胞穿膜数减少（P<0.05）;过表达或抑制CXCL12、CXCR4和CXCR7后细胞凋亡数无改变增多（P>0.05）。
结论：在体外细胞实验中,趋化因子CXCL12及受体CXCR4/CXCR7均参与了滋养细胞增殖、迁移侵袭的调控,因此CXCL12、CXCR4和CXCR7在胎盘植入绒毛过度侵袭中发挥着重要的作用。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！