粪产碱菌粪亚种的培养方法与注意事项!
小杨 / 2022-11-09 09:45:14


粪产碱菌粪亚种是Alcaligenes属的微生物,原产地为中国。好氧革兰氏阴性杆菌,动物条件致病菌。主要用途为研究。

一、菌种简介
平台编号:Bio-52498
规格:冻干物
拉丁属名:Alcaligenes Faecalis Subsp. Faecalis
中文名称:粪产碱菌粪亚种
拉丁名称:Alcaligenes faecalis subsp. faecalis
来源历史:<--ATCC
收藏时间:2020-09-16 00:00:00.0
原始编号:16
模式菌株:是
主要用途:质量控制菌株
生物安全级别: 一级
其它保藏中心编号:ATCC 8750=CGMCC 1.1786==JCM 1474=JCM 20663=ATCC 8750=BCRC 10828=CCM 1052=CCUG 1325=CCUG 1814=CECT 928=CIP 60.80=DSM 30030=IAM 12369=IAM 12586=IFO 13111=KCTC 2678=LMG 1229=LMG 2100=LMG 3366=LMG 3369=LMG 3371=NBRC 13111
培养基编号:2
培养温度:30-37℃
培养时间:24-48h
需氧类型:好氧
分离基物:**
采集地:**
保存方法: 冷冻干燥管保藏
用途:质量控制菌株
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)

二、培养基
*营养琼脂培养基(NA)
*胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)
*LB 培养基(以上三款培养基任选中一款)

三、产品特点
1、菌种功能明确、品种稳定、应用;
2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;
3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;
4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;
5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;
6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。

四、产品优势
1、产品质量稳定,是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。
2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。
3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。
4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。

五、培养方法
1、孢子制备
⑴ 放线菌孢子的制备
一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。
⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备
霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。
2、种子制备
⑴ 摇瓶种子制备
摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。
⑵ 种子罐种子制备
种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。

六、保藏条件
斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。 

七、注意事项
1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液(即以上建议的培养基配方,不加琼脂)或者无菌水,滴入冻干管中,轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液,接种在培养基上(建议不超过 2 支斜面或平板;或直接接种液体培养基,以不超过 5ml 为宜);
2)经过冷冻干燥保藏,菌种处于休眠状态,复苏培养时可能会延迟生长,这时需较长的培养时间; 若您收到的是已复苏的培养物(非冻干菌),则可以直接用于您的实验,或根据需要转接培养;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;二次接种量要多,固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显,液体培养要静止培养;
3)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;
4)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;
5)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;
6)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和微生物菌种查询网联系;
7)如若有菌种复苏不活或者污染等情况,请在收到菌钟后 2 个月内联系,逾期不予受理;
8)打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛;
9)安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作;
10)甘油管使用:使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降;
11)西林瓶开封:用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部,在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖, 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞,用 75%酒精棉消毒瓶口部分,使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。

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