人肾皮质近曲小管上皮细胞的运输和保存及培养方法！
小杨 / 2022-08-09 09:22:52
人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2)属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7 基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7 基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7 转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2 细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317 产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418 筛选转导克隆。Southern 和FISH 分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR 检测证实HK-2 细胞基因组中含有E6/E7 基因。
一、细胞简介
平台编号：Bio-73050
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：HK-2
细胞名称：HK-2（人肾皮质近曲小管上皮细胞）
细胞用途：仅供科研使用。
种属：人
年龄（性别）：成年
组织来源：正常肾
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
背景描述：HK-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2；Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示，HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实，HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。
生长培养基：MEM＋10% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
用途：(STR鉴定正确)
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2)特性：
1）来源：正常肾
2）形态：上皮细胞样
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装
三、细胞的运输和保存：
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
四、人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2)培养步骤
1、人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2)培养基及培养冻存条件准备：
1）准备角化培养基（Defined K-SFM，货号：10785-012）;角化因子（500X）；添加5ng/mL EGF；双抗1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2、细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。
2、加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
下面T25 瓶为例；
1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2、1000RPM 离心5 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO 至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
五、注意事项
1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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